【原理】
将滤纸或纤维素膜作为固相载体交联或吸附抗原后、再分别与未知抗体和酶标第二抗体反应，经酶催化底物而显色，从而检测相应抗体。
【试剂】
（1）硝酸纤维膜，孔径为 0．3μm。
（2）2% BSA（蒸馏水配制）。
（3）0．01mol/L pH 7．2 PBS。
（4）抗人 Ig-HRP 结合物。
（5）二氨基联苯胺（DAB）底物溶液：
将 30mgDAB 溶于 0．05mol/L pH 7．4 Tris-HCl缓冲液 100mL 中，过滤，4℃ 暗处贮存，临用时加 3% H2O2，最终浓度为 0．05% 。
【方法】
1）微孔滤膜切成 4mm ×50mm 的长条，用铅笔标明位置，点距 4mm，浸于 PBS中 15min，用滤纸吸干。
2）在滤膜相应位置点精子抗原 2μL，4℃ 作用 30min，吸干，PBS漂洗 3次。
3）浸于 2% BSA 溶液中，4℃ 封闭 15min，洗 3次，吸干。
4）1∶4待检血清点样 0．5μL，4℃ 15min，洗 3次，吸干。
5）浸于酶标二抗溶液（1∶1 500）中，4℃ 15min，洗 4次，每次 5min。
6）DAB-H2O2底物显色 10min，PBS洗 0．5min。
【结果】
呈现褐色斑点者为阳性，无色或微黄色为阴性。
