一、概述
显而易见,描述精子运动特征需要采用标准的、规范化术语。但所报告的各参数值也应具有可比性。例如,Cellsoft小结报告提供了沿直方图的线性速度的平均值。如果只阅读该方法学手册,似乎会认为 HT-M2030和 CTS-30系统所显示的是 VCL,而不是 VSL 或 VAP。其实在 Cellsoft小结报告中并未提供上述速度指标,虽然 VSL 的平均值能根据线性速度和线性值计算求得。因此,由不同系统所报告的不同的速度指标间存在着一些混淆不清之处。
CASMA 系统之间的另一个分歧在于用来计算平均运动特征的细胞亚群。本章第五节涉及了碰撞效应计算方法和有关浓度依赖性的问题,并且还考虑到在描述精液中精子运动特征的均值时需要对前向活动力制订某种定义(这种考虑适于所有系统,而不仅仅是针对Cellsoft的)。
二、临床意义
(一)精液分析
CASA 系统的目的是为了更快地提供精子浓度、精子活动力的数值和(或)提供比传统精液分析方法更为准确的分析,即使对于缺乏经专门培训的男性学技术人员的许多小型或非专业化的实验室,应用 CASA 系统也不是个难题。但即使在提供高水平的不孕症诊治服务和遵照 W HO 推荐的采用适当标准和质量控制方法的医学中心,CASA 系统亦尚未具备充分准确性以取代传统方法。
CASMA 参数应该将精子更精确地分为非前向性和前向性活动两个亚组。同时也应按照 W HO 推荐的亚型分类标准,应用客观的定义,将活动精子进一步分为"快速、线性"和"缓慢或非线性"两个既实用又准确的亚组。
比较有关精子运动的临床研究时,必须考虑所应用的运动分析方法,因为对于反映某些运动特征的指标(如 ALH)而言,其绝对值因方法而异(见本章第四节)。在保持相同定性关系的同时,其特殊的定量关系必将随之变化。
总的精子浓度诊断价值不大,只有精液样本中前向运动的精子(及其运动特征)才具有生物学意义和临床诊断价值。因此,这些指标(包括形态学和精子活力等)才是应该测定的精液特征。看来没有必要花很大力气试图用现代技术来对精子特征进行既不可靠又不准确的测定,相反应该掌握时机利用现代技术对精子的潜在功能进行评价,从而促进临床男性学显著进展。
(二)精子-宫颈黏液相互作用
若干研究结果均已证明,精子运动特征对精子-宫颈黏液相互作用的结局有某种影响。若精子具有良好的前向性(如 VSL 平均值≥2.5μm /s)且伴有较大的 ALH 平均值(如≥7.5μm,应用定时曝光显微摄影术技术测得),是预测体外精子-黏液相互作用试验(spermmucusinteraction test,SMIT)结局的重要辨别因子,有人报道应用这些参数值并结合前向运动精子的最小浓度(≥25 × 106精子 /mL,且 VSL≥10μm /s),则显示 5/6 的优质精液样品的SMIT结果均属正常。而所有未能满足上述 3 个指标的 13 个样品的 SMIT 结果均异常。此外,发现少数对象的活动精子始终不能穿透或通过宫颈黏液,其原因是 ALH 值极小。
倘若要在体内获得受孕,穿透宫颈黏液是精子必须面临的第一个障碍,而体内生育力预测是不孕症诊断的最终目的,故精子运动特征的分析在评价精子潜在功能的研究中具有十分重要的意义。
(三)仓鼠卵穿透试验
据报道有些研究人员已应用去透明带仓鼠卵穿透试验(HEPT),提供了关于精子运动特征与精子受精能力之间互相关系的实质性证据。应用经洗涤与预培养的精子悬液的运动特征,已获得正常与异常 HEPT 结果的最佳区别标准。这类精子与未经处理的精液精子相比具有较高的 VSL 值和较大的 ALH 值,而较小的平均 ALH 值与正常 HEPT 结果之间的明显关系不能从生理学上得到解释,尽管在统计学上其区别标准的把握度是可靠的。
有关精子超激活与 HEPT 的关系尚待研究。但在精子与去透明带卵母细胞之间相互作用的情况下,对于超激活的精子活动力并无生物学要求,因为精子无需穿透卵的外壳(即透明带),两者也没有明确肯定的关系。由于 HEPT 本身只是人类精子潜在功能的一种间接检测方法,故这种方法与其他的精子功能检测项目(如腹腔中精子回收)或运动特征的分析之间应存在某些关系。然而,这些相关性未必反映直接的生物学过程。因为这些检测方法的参数本身可能只是反映继发事件。增加精子细胞内的钙会导致增加其鞭毛的曲率,而正是鞭毛曲率决定了 ALH 值。钙的流入与获能后期和诱发顶体反应有关。因此可以预见正在获能或已经获能的精子中 ALH 值较大,超激活精子的比例也增加。或许正是那些具有最大ALH 值的细胞产生了超激活的活动力,从而降低了前向运动精子的平均 ALH 值。显然很难利用定时曝光显微摄影术来识别超激活的精细胞。
(四)体外受精
显然,精子活动力对于体内和体外受精都是必要的,在体内受精情况下,精子活动力对于成功的精子运行也是至关重要的,自然体外受精则绕过了这一步。至今关于临床体外受精(IVF)与精子运动特征分析的关系,正式发表的文献尚不太多。Jeulin等人报道,经上游处理后的精子通过预培养,若使体外卵母细胞受精率不超过 33% ,定时曝光显微摄影术分析显示其平均 ACH 值较低,而精子顶体形态学异常率也较高。
很明显,今后若干年内,在这个领域将有越来越多文献出现,从而有希望确立精子运动特征与其获能有关的动力学变化之间的明确关系,并应用到临床实际之中。
(五)体内生育力预测
对于成功的受孕过程来说,男女双方的生育力具有同等的重要意义,体内潜在生育力的预测不同于精子授精能力的诊断性评估。受精最终成功之前必须成功地完成下列步骤:精子与黏液的相互作用,精子运行,获能,穿透卵的外壳,顶体反应,男性与女性配子之间的结合反应。因此应该建立一套测定精子功能的方法,以评价包括受孕在内的所有生理过程。
除了精子运行之外,对授精过程中的大多数步骤均能在体外实现。由于精子与黏液的相互作用、精子运行和在授精中的重要作用,精子活动力,尤其是精子运动特征分析将成为这种测试系统的一个主要组成部分。然而要验证该测试系统的可靠性必须进行相应的前瞻性临床试验。在开始这种重要课题之前,我们必须保证各种实验方法与步骤的完善,从而将方法学错误的混杂影响减少到最低限度。CASA /CASMA 系统还未到达此要求。值得注意的是,课题开展过程中,软件的更新与测试系统的改良会使最终的统计分析受到不利影响。