拼音名：Gouduonluoxuontl Yimiao
英文名：Leptospira Vaccjne
书页号：2005年版三部-37
本品系用各地区主要的钩端螺旋体流行菌型的菌株，经培养、杀菌后，制成单价或多价疫苗。用丁预防钩端螺旋体病。
1 基本要求
生产和检定用设施、水、原料及辅料、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2 制造
2.1 菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.1 菌种名称及来源
主要生产用菌种如下：
清群 血清型 株名 毒力
黄疸出血群 赖型 赖、017、江4、70091 强
犬群 犬型 611、桂44 弱
致热群 致热型 [4]、HBS5 强
秋季群 秋季型 临4 强
澳洲群 澳洲型 沃34、115、620 弱
波摩那群 波摩那型 罗、109 弱
流感伤寒群 临海型 临6 强
七日热群 七日热型 401、广229、245 弱
2.1.2 生产用菌种的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.3 生产用菌种的检定
生产用菌种应先通过体重120～220g的豚鼠传代，2～3天后或豚鼠濒死前抽取其心血或摘取肝组织，接种生产用培养基或其他适宜培养基，并培养4代以上方可进行各项检定。
2.1.3.1 形态及培养特性
将菌种接种于生产培养基，接种量在5%以下，28～32℃培养5～10天，培养物在显微镜下放大400倍观察，钩端螺旋体菌数为每视野100条以上。培养物应透明，微带乳光，摇动时稍有云雾状浑浊，菌形整齐、运动良好、两端形成钩状。
2.1.3.2 血清凝集试验
用培养3～10天的活培养物，在显微镜下放大400倍观察，钩端螺旋体菌数为每视野50～100条，运动良好，且无自凝，与参考血清做定量凝集反应，其凝集效价应达血清原效价之半。终点效价以菌数减少50%(++)为判定标准。新菌种要求用凝集素交叉吸收试验法定型。
2.1.3.3 毒力试验
用体重180～220g的豚鼠6只，分成两组．每只豚鼠经皮下注射已培养5～10天、在显微镜下放大400倍观察菌数为每视野50～100条活的待检培养物2ml。其中一组于注射后48小时抽取心血，按1％量接种生产培养基或其他适宜培养基2支，培养14天，镜检呈阳性(生长钩端螺旋体)，即属弱毒菌株；另一组于注射后观察10天，至少应有2只豚鼠因患钩端螺旋体病死亡，即属强毒菌株。
对于传代保存的已知的弱毒或强毒株菌种，也分别按上述相应方法进行，应符合弱毒株或强毒株的规定为合格。
2.1.3.4 免疫力试验
用培养5～10天经56～58℃加温1小时或3.0g/L苯酚杀死的钩端螺旋体培养物，在显微镜下放大400倍观察菌数，每视野钩端螺旋体为70～100条，以生理氯化钠溶液做3倍稀释，免疫体重120～220g豚鼠3只(同时饲养3只豚鼠作为对照组)，皮下免疫2次，第1次0.5ml，第2次1ml，间隔5天，末次注射后10～12天，用同株或同型异株培养5～lO天、在显微镜下放大400倍观察菌数为每视野50～100条的培养物2ml进行皮下攻击。
强毒株：攻击后观察10天，免疫组豚鼠应健存，外观及食欲正常，不耸毛，运动活泼，体重增加．解剖无黄疸。对照组豚鼠至少应有2只患钩端螺旋体病死亡，判为合格。
弱毒株：攻击后，24小时抽取心血，分别接种2管5％～8％兔血清培养基，每管4～5ml。接种1～2滴心血(约为1％接种量)。培养14天。免疫组心血培养要求2/3以上为阴性，对照组均为阳性，判为合格。
2.1.3.5 抗原性试验
用培养5～10天经56～58℃加温1小时或3.Og/L苯酚杀死的钩端螺旋体培养物，在显微镜下放大400倍观察菌数，每视野钩端螺旋体为70～100条，静脉免疫体重2.0～2.5kg家兔3只，共注射3次，间隔5人，第1次1m1、第2次2ml、第3次5ml，末次注射后10～15天取家兔血清与同株培养物做凝集反应，至少有2只家兔血清效价达到1：10 000以上判为合格。
2.1.4 菌种传代及保存
2.1.4.1 菌种传代
为保存菌种的毒力及纯度，每传3～6代，应通过体重120～220g豚鼠传代一次，并同时做血清学特性检查和生物学特性检查，合格方可作为保存菌种。
2.1.4.2 菌种保存
菌种应保存于含兔血清培养基或其他适宜培养基内，于18～22℃避光定期传代保存或液氮保存。
2.2 原液
每种血清型使用1个菌株。
2.2.1 生产用种子
生产用菌种经培养5～10天生长良好后，取2ml培养液，皮下注射体重120～220g的豚鼠，2～3天后或动物濒死前取心血(或摘取肝组织)，按1％以下量接种于生产用培养基或其他适宜培养基，28～32℃培育7～18天(不易生长的菌株可延至30天)，做纯菌试验及血清学特性检查合格后，再于生产用培养基或其他适宜培养基连续传代至少4次，经检查为生长良好、运动活泼的纯培养物方可用于大量接种。
液氮保存的菌种复苏后即可用于生产。
2.2.2 生产用培养基
可采用综合培养基或半综合培养基。
2.2.3 培养
用lOL大瓶或大罐通气培养时，经28～32℃培养4～14天，在显微镜下放大400倍观察，菌数应达300条以上。取样做纯菌试验及镜检，应无杂菌。培养物可用适宜的方法浓缩。
2.2.4 杀菌
培养物用苯酚(含量应不高于3.Og/L)或其他适宜杀菌剂杀菌。至少放置30分钟，取样镜检杀菌情况。大罐培养亦可先合并后杀菌。原液如放置半年以上，合并前应逐瓶做无菌检查。
2.2.5 原液检定
按3.1项进行。
2.2.6 原液保存
原液应于2～8℃保存。
2.3 半成品
2.3.1 杀菌后的原液，按预定比例将不同菌型培养物混合成1批。
2.3.2 疫苗所含菌型应按当地主要流行菌型配制，5价以下(含5价)者，每型含菌数应不低于1.5×10〈8〉条/ml；6价(含6价)以上，每型含菌数不应低于1.0 ×10〈8〉条/ml。各型比例不应超过或低于计算量的10％，疫苗的总菌数应不超过1.25×10〈9〉条/ml。
2.3.3 加入氯化钠，使其最终含量为7.5～9.5g/L。
2.3.4 半成品检定
按3.2项进行。
2.4 成品
2.4.1 分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2 分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.4.3 规格
每瓶5ml。
2.4.4 包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3 检定
3.1 原液检定
3.1.1 浓度测定
显微镜计数法测定菌数。
3.1.2 苯酚测定
应不高于3.0g/L(附录ⅥM)。
3.1.3 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。如大瓶培养应逐瓶做无菌检查。
3.2 半成品检定
无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。若移至大瓶存放，应按前、中、后抽样做无菌检查。
3.3 成品检定
3.3.1 鉴别试验
采用血清凝集试验，按疫苗所含菌型抗原的抗血清与本品做试管凝集试验，应产生特异性凝集。
3.3.2 外观
应为微带乳光的悬液，无异臭，无摇小散的凝块及异物。
3.3.3 化学检定
3.3.3.1 pH值
应为6.4～7.4(附录V A)。
3.3.3.2 氯化钠含量
应为7.5～9.5g/L(附录ⅦG)。
3.3.3.3 苯酚含量
应不高于3.0g/L(附录Vl M)。
3.3.4 效力测定
按疫苗所含菌型价数，用生理氯化钠溶液将本品稀释成每型含菌数5×10〈7〉条/ml，按2.1.3.4项进行。
3.3.5 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
3.3.6 异常毒性检查
依法检查(附录ⅫF)，应符合规定。
4 保存、运输及有效期
于2～8℃避光保存和运输，自分装之日起有效期为1年6个月。
5 使用说明
钩端螺旋体疫苗使用说明
【药品名称】
通用名称：钩端螺旋体疫苗
英文名称：Leptospira Vaccine
汉语拼音：Gouduanluoxuanti Yimiao
【成分和性状】本品系用各地区主要的钩端螺旋体流行菌型的菌株，经培养杀菌后制成单价或多价疫苗。为微带乳光的液体，含苯酚防腐剂。
【接种对象】流行地区7～60岁的人群。
【作用与用途】接种本疫苗后，可使机体产生免疫应答。用于预防钩端螺旋体病。
【规格】每瓶5ml。
【用法用量】 (1)上臂外侧三角肌附着处皮下注射。
(2)共注射2针，间隔7～10天。第1针注射0.5ml，第2针注射1.0ml。
7～13周岁用量减半。必要时7周岁以下儿童可酌量注射，但不超过成人量的l/4。
应在流行季节前完成注射。
【不良反应】全身及局部反应一般轻微，偶有发热及局部疼痛、红肿，一般可自行缓解。
【禁忌】(1)发热，患急性传染病、严重心脏病、高血压、肝脏疾病、肾脏疾病、神经系统和精神疾病者。
(2)妊娠期、哺乳期妇女。
(3)有过敏史者。
(4)月经期暂缓注射。
【注意事项】(1)疫苗变色、曾经冻结、有异物、有摇不散的凝块或疫苗瓶有裂纹者，均不得使用。
(2)应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应在现场休息片刻。
(3)严禁冻结。
【贮藏】于2～8℃避光保存和运输。
【包装】
【有效期】1年6个月。
【执行标准】
【批准文号】
【生产企业】
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