拼音名：Chongzu Yixing Ganyan Yimiao(CHO Xibao)
英文名：Hepatitis B Vaccine Made by Recombinant DNA Techniques in CHO Cell
书页号：2005年版三部-118
本品系由重组CHO细胞表达的乙型肝炎(简称乙肝)病毒表面抗原(HBsAg)经纯化，加入氢氧化铝佐剂后制成。用于预防乙型肝炎。
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”有关要求。
2 制造
2.1 生产用细胞
2.1.1 细胞名称及来源
生产用细胞为DNA重组技术获得的表达HBsAg的CHO细胞C〈［28］〉株。
2.1.2 细胞库的建立及传代
应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
C〈［28］〉株主细胞库的传代应不超过第2l代，工作细胞库应不超过第26代，生产疫苗的最终细胞代次应不超过第34代。
2.1.3 主细胞库及工作细胞库细胞的检定
应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
2.1.3.1细胞外源因子检查
细菌和真菌、支原体、细胞病毒外源因子检查均应为阴性。
2.1.3.2 细胞鉴别试验
应用同工酶分析、生物化学方法、免疫学、细胞学和遗传标记物等任何方法进行鉴别，应为典型CHO细胞。
2.1.3.3 HBsAg表达量
主细胞库及工作细胞库细胞HBsAg表达量应不低于原始细胞库的表达量。
2.1.4 保存
细胞种子应保存于液氮中。
2.2 原液
2.2.1 细胞制备
经胰蛋白酶消化细胞，置适宜条件下培养。
2.2.2 培养液
培养液为含有适量灭能小牛血清的DMEM液。小牛血清的质量应符合要求(附录ⅫD)。
2.2.3 收获
培养适宜天数，当细胞表达HBsAg达到1.0mg／L以上时收获培养上清液。
2.2.4 纯化
采用经批准的纯化方法进行纯化后．收获纯化的HBsAg。
2.2.5 甲醛处理
纯化的HBsAg中按1：2000比例加入甲醛溶液，置37℃保温72小时。
2.2.6 除菌过滤
HBsAg经超滤、浓缩、除菌过滤后即为原液(亦可在甲醛处理前进行除菌过滤)。
2.2.7 原液检定
按3.1项进行。
2.3 半成品
2.3.1 配制
根据测定的蛋白质含量稀释原液。使HBsAg的最终含量为10μg／ml或20μg/ml。加入氢氧化铝佐剂吸附后，加入硫柳汞作为防腐剂，即为半成品。
2.3.2 半成品检定
按3.2项进行。
2.4 成品
2.4.1 分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2 分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.4.3 规格
每瓶1.0ml。每1次人用剂量为1.0ml，含HBsAg10μg或20μg。
2.4.4 包装
符合“生物制品包装规程”规定。
3 检定
3.1 原液检定
3.1.1 蛋白质含量
应为100～200μg／m1(附录ⅥB第二法)。
3.1.2 特异蛋白带
依法检查(附录Ⅳc)，在分离胶中应有分子质量23kD、27kD蛋白带，可以有30kD蛋白带及HBsAg二聚体蛋白带。
3.1.3 纯度
采用高效液相色谱法(附录ⅢB)测定，用SEC HPLC法：亲水树脂体积排阻色谱柱，排阻分子质量低于1000kD，孔径100nm，粒度17μm，直径7.5mm，长30cm；流动相为0.05mol／L磷酸盐缓冲液，pH6.8；用波长280nm检测。按面积归一化法计算乙型肝炎表面抗原纯度，应不低于95.0％。
3.1.4 牛血清白蛋白残留量
采用酶联免疫法，牛血清白蛋白残留量应不高于50 ng／剂。
3.1.5 CHO细胞DNA残留量
应不高于lOpg／剂(附录ⅨB)。
3.1.6 CHO细胞蛋白残留量
采用酶联免疫法(双抗体夹心法)测定，应不高于总蛋白质含量的0.05％。
3.1.7 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
3.1.8支原体检查
依法检查(附录ⅫB)，应符合规定。
3.2 半成品检定
3.2.1 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
3.2.2 细菌内毒素检查
应小于10 EU／剂(附录ⅫE凝胶限量试验)。
3.3 成品检定
3.3.1 鉴别试验
采用酶联免疫法检测，应为HBsAg。
3.3.2 外观
应为乳白色混悬液体，可因沉淀而分层，易摇散，不应有摇不散的块状物。
3.3.3 化学检定
3.3.3.1 pH值
应为5.5～6.8(附录V A)。
3.3.3.2 铝含量
应不高于0.43mg／ml(附录ⅦF)。
3.3.3.3 硫柳汞含量
应不高于100μg／ml(附录ⅦB)。
3.3.3.4 游离甲醛含量
应不高于50μg／m1(附录ⅥL)。
3.3.4 效价测定
将疫苗连续稀释，每个稀释度接种4～5周龄未孕雌性NIH或BALB／c小鼠20只，每只腹腔注射1.0ml，用参考疫苗作平行对照，4～6周后采血，用放射免疫法或酶联免疫法测定抗-HBs，计算ED〈［50］〉，供试品ED〈［50］〉／参考疫苗ED〈［50］〉之值应不低于1.0。
3.3.5 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
3.3.6 异常毒性检查
依法检查(附录ⅫF)，应符合规定。
3.3.7 细菌内毒素检查
应小于10EU/剂(附录ⅫE凝胶限量试验)。
4 保存、运输及有效期
于2～8℃避光保存和运输。自效价测定合格之日起，有效期为2年。
5 使用说明
重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)使用说明
【药品名称】
通用名称：重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)
英文名称：Hepatitis B Vaccine Made by Recombinant DNA Techniques in CHO Cell
汉语拼音：Chongzu Yixing Ganyan Yimiao(CHO xibao)
【成分和性状】本品系由重组CHO细胞表达的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)经纯化，加入氢氧化铝佐剂制成。为乳白色悬浊液体，可因沉淀而分层，易摇散，含硫柳汞防腐剂。
【接种对象】本疫苗适用于乙型肝炎易感者，尤其是下列人员：
(1)新生儿，特别是母亲为HBsAg、HBeAg阳性者。
(2)从事医疗工作的医护人员及接触血液的实验人员。
【作用与用途】接种本疫苗后，可使机体产生抗乙型肝炎病毒的免疫力。用于预防乙型肝炎。
【规格】每瓶1.0ml。每1次人用剂量为1.0ml，含HBsAg 10μg或20μg。
【用法用量】(1)于上臂三角肌肌内注射。
(2)基础免疫程序为3针，分别在第O个月、第1个月、第6个月接种，新生儿第1针在出生24小时内注射。一般易感者使用10μg／瓶，母婴阻断的新生儿使用20μg/瓶。
【不良反应】个别人可有注射局部疼痛、红肿或中、低度发热，一般不需特殊处理，可自行缓解，必要时可对症治疗。
【禁忌】(1)发热、患急性或慢性严重疾病者。
(2)过敏体质者。
【注意事项】(1)注射前应充分摇匀。
(2)疫苗有摇不散的块状物或疫苗瓶有裂纹者，不得使用。
(3)应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应在现场休息片刻。
(4)严禁冻结。
【贮藏】于2～8℃避光保存和运输。
【包装】
【有效期】2年。
【执行标准】
【批准文号】
【生产企业】
企业名称：
生产地址：
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传真号码：
网 址：
