拼音名：Chongzu Yixing Ganyan Yimiao(Jiaomu)
英文名：Hepatitis B Vaccine Made by Recombinant DNA Techniques in Yeast
书页号：2005年版三部- 115
本品系由重组酵母菌表达的乙型肝炎(简称乙肝)病毒表面抗原(HBsAg)经纯化，加入铝佐剂制成。用于预防乙型肝炎。
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”有关要求。
2 制造
2.1 生产用菌种
2.1.1 名称及来源
生产用菌种为美国默克公司以DNA重组技术构建的表达HBsAg的重组酵母原始菌种，菌种号为2150-2-3(pHBS56-GAP347/33)，也可采用经批准的其他重组酵母菌种。
2.1.2 种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。
由美国默克公司提供的菌种经扩增1代为主种子批，主种子批扩增l代为工作种子批。
2.1.3 种子批菌种的检定
主种子批及工作种子批应进行以下项目的全面检定。
2.1.3.1 培养物纯度
培养物接种于哥伦比亚血琼脂平板和酶化大豆蛋白琼脂平板，分别于20～25℃和30～35℃培养5～7天，应无细菌和其他真菌被检出。
2.1.3.2 质粒保有率
平板复制法测试的质粒保有率应不低于95％。
2.1.4 菌种保存
主种子批和工作种子批菌种应于液氮中保存，工作种子批菌种保存于-70℃应不超过6个月。
2.2 原液
2.2.1 发酵
取工作种子批菌种，于适宜温度和时间经锥形瓶、种子罐和生产罐进行三级发酵，收获的酵母菌应冷冻保存。
2.2.2 培养物检定
2.2.2.1 培养物纯度
同2．I．3.1项。
2.2.2.2 质粒保有率
平板复制法测试的质粒保有率应不低于90％。
2.2.3 纯化
用细胞破碎器破碎酵母菌，除去细胞碎片，以硅胶吸附法粗提HBsAg，疏水色谱法纯化HBsAg，经硫氰酸盐处理后，稀释和除菌过滤。
2.2.4 纯化产物检定
2.2.4.1 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
2.2.4.2 蛋白质浓度
应为20.0～27.0μg/ml或60.0～81.0μg/ml(附录ⅥB第二法)。
2.2.4.3 特异蛋白带
依法测定(附录Ⅳ C)，分子质量应在20～25kD之间。
2.2.4.4 纯度
采用免疫印迹法(附录ⅧA)测定，所测供试品不得出现国家药品检定机构认可以外的酵母杂蛋白；采用高效液相色谱法(附录ⅢB)。HBsAg含量应不低于99.0％，或杂蛋白应不高于1.0％。
2.2.4.5 细菌内毒素检查
应小于10EU／m1(附录ⅫE凝胶限量试验)。
2.2.5 原液
2.2.5.1 配制
加入适量甲醛溶液，置37℃适宜时间，经铝佐剂吸附后，加入硫柳汞作为防腐剂，即为原液。
2.2.5.2 原液检定
按3.1项进行。
2.3 半成品
2.3.1 配制
蛋白质浓度为20.0～27.0μg/ml或60.0～81.0μg/ml的原液分别与铝佐剂等量或1：5混合，即为半成品。
2.3.2 半成品检定
按3.2项进行。
2.4 成品
2.4.1 分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2 分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.4.3 规格
每瓶0.5ml、1.0ml。每1次人用剂量0.5ml(含HBsAg 5μg)或1.0ml(含HBsAg 10μg)。
2.4.4 包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3 检定
3.1 原液检定
3.1.1 吸附完全性
取铝佐剂吸附后原液于6500g离心5分钟取上清液，测定参考品、原液及原液上清液HBsAg的含量(附录XA)。以参考品HBsAg含量的对数对应其吸光度值对数进行直线回归，相关系数应不低于0.99，将原液及其上清液的吸光度值代入回归方程，计算其HBsAg含量，再按下式计算吸附率，应不低于95％。
P＝1－C〈［s］〉／C〈［t］〉×100％式中P为吸附率，％；
C〈［s］〉为原液上清液的HBsAg含量，μg/ml；
C〈［t］〉为原液的HBsAg含量，μg/ml。
3.1.2 硫氰酸盐含量
取加硫柳汞之前的原液，于6500 g离心5分钟，取上清液。分别取含量为1.0μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg／ml、10.0μg/ml的硫氰酸盐标准溶液，原液上清液，生理氯化钠溶液各5.0ml于试管中。每一原液取2份，在每管中依次加入硼酸盐缓冲液(pH9.2)0.5ml、2.25％氯胺T-生理氯化钠溶液0.5ml、50％吡啶溶液(用生理氯化钠溶液配制)1.0ml，每加一种溶液后立即混匀，加完上述溶液后静置10分钟，以生理氯化钠溶液为空白对照，在波长415 nm处测定各管吸光度。以标准溶液中硫氰酸盐的含量对应其吸光度均值进行直线回归，计算相关系数，应不低于0.99，将原液上清液的吸光度均值代入回归方程，计算出硫氰酸盐含量，应小于1.0μg/ml。
3.1.3 Triton X-100含量
取加硫柳汞之前的原液，于6500g离心5分钟，取上清。分别取含量为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml的Triton X-100标准溶液，原液上清液，生理氯化钠溶液各2.0ml于试管中。每一原液取2份，每管分别加入5％(ml/ml)苯酚溶液1.0ml，迅速振荡，室温放置15分钟。以生理氯化钠溶液为空白对照，在波长340 nm处测定各管吸光度。以标准溶液中Triton X-100的含量对应其吸光度均值进行直线回归，计算相关系数，应不低于0.99，将原液上清液的吸光度均值代入回归方程，计算出Triton X-100含量，应小于15·0μg／ml。
3.2 半成品检定
3.2.1 化学检查
3.2.1.1 pH值
应为5.5～7.2(附录V A)。
3.2.1.2 游离甲醛含量
应小于20μg/ml(附录ⅥL)。
3.2.1.3 铝含量
应为0.35～O．62mg/ml(附录ⅦF)。
3.2.1.4 硫柳汞含量
应为30～70μg/ml(附录ⅦB)。
3.2.1.5 渗透压摩尔浓度
应为280 mOsmol/L±65 mOsmol／L(附录V H)。
3.2.2 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
3.2.3 细菌内毒素检查
应小于10 EU/ml(附录ⅫE凝胶限量试验)。
3.3 成品检定
3.3.1 鉴别试验
采用酶联免疫法检测，应证明为HBsAg。
3.3.2 外观
应为乳白色混悬液体，可因沉淀而分层，易摇散，不应有摇不散的块状物。
3.3.3 化学检查
3.3.3.1 pH值
应为5.5～7.2(附录V A)
3.3.3.2 铝含量
应为0.35～0.62mg/ml(附录ⅦF)。
3.3.3.3 硫柳汞含量
应为30～70μg／ml(附录ⅦB)。
3.3.4 体外相对效力测定
应不低于0.5(附录X A)。
3.3.5 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
3.3.6 异常毒性检查
依法检查(附录ⅫF)，应符合规定。
3.3.7 细菌内毒素检查
应小于10EU／m1(附录ⅫE凝胶限量试验)。
4 保存、运输及有效期
于2～8℃避光保存和运输。自效力测定合格之日起，有效期为2年。
5 使用说明
重组乙型肝炎疫苗(酵母)使用说明
【药品名称】
通用名称：重组乙型肝炎疫苗(酵母)
英文名称：Hepatitis B Vaccine Made by Recombinant DNA Techniques in Yeast
汉语拼音：Chongzu Yixing Ganyan Yimiao。。(Jiaomu)
【成分和性状】本品系由重组酵母表达的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)经纯化，加氢氧化铝佐剂制成。为乳白色混悬液体，可因沉淀而分层，易摇散，含硫柳汞防腐剂。
【接种对象】本疫苗适用于乙型肝炎易感者，尤其下列人员：
(1)新生儿，特别是母亲为HBsAg、HBeAg阳性者；
(2)从事医疗工作的医护人员及接触血液的实验人员。
【作用与用途】接种本疫苗后，可刺激机体产生抗乙型肝炎病毒的免疫力。用于预防乙型肝炎。
【规格】每瓶0.5ml、1.0ml。每1次人用剂量0·5m(含HBsAg 5μg)或1.0ml(含HgsAg 10μg)。
【用法用量】(1)于上臂三角肌肌内注射。
(2)基础免疫程序为3针，分别在第O个月、第1个月、第6个月接种。新生儿第1针在出生后24小时内注射。16岁以下人群每1次剂量为5μg，16岁或16岁以上人群每1次剂量为10μg。
【不良反应】个别人可有注射局部疼痛、红肿或中、低度发热，一般不需特殊处理，可自行缓解，必要时可对症治疗。
【禁忌】(1)发热、患急性或慢性严重疾病者。
(2)对酵母成分过敏者。
【注意事项】(1)注射前应充分摇匀。
(2)疫苗有摇不散的块状物或疫苗瓶有裂纹者，均不得使用。
(3)应备有肾上腺素等药物，以防偶有严重过敏反应发生时使用。接受注射者在注射后应在现场休息片刻。
(4)严禁冻结。
【贮藏】于2～8℃避光保存和运输。
【包装】
【有效期】2年。
【执行标准】
【批准文号】
【生产企业】
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