拼音名：Zhusheyong A Xing Roudu Dusu
英文名：Botulinum Toxin Type A for Injection
书页号：2005年版三部－201
本品系用A型肉毒结晶毒素经稀释，加入稳定剂后冻干制成。
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2 制造
2.1 菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.1 名称与来源
生产用菌种为产毒力高的A型肉毒梭菌Hall株或其他A型肉毒梭菌。
2.1.2 种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.3 种子批的传代
主种子批应不超过5代，工作种子批应不超过10代。
2.1.4 种子批菌种的检定
检定菌种可采用明胶琼脂半固体培养基、血琼脂平板培养基、乳糖卵黄琼脂平板培养基或其他适宜培养基。
菌种应具有典型的形态、培养和生化特性，应产生不低于1.0×10〈5〉LD50/ml的A型肉毒毒素。
2.1.5 种子批保存
主种子批和工作种子批均应冻干保存于2～8℃；工作种子批也可用明胶琼脂半固体培养基于-20℃保存。
2.2 结晶毒素
2.2.1 原制毒素
2.2.1.1 产毒培养基
采用含胰酶消化酪蛋白、酵母透析液(或酵母浸出粉)、葡萄糖培养基，或经批准的其他适宜培养基。
2.2.1.2 生产用种子接种产毒培养基后，在适宜温度培养一定时间。
2.2.1.3 每瓶取样镜检，应无杂菌，经除菌过滤，即为原制毒素，其毒力应为10〈5〉～10〈6〉 LD50/ml。
2.2.2 毒素纯化及结晶
2.2.2.1 毒素可经等电点沉淀、核糖核酸酶处理、离子交换色谱、硫酸铵浓缩和透析及自然结晶等程序，或用经批准的其他适宜方法进行纯化。
2.2.2.2 毒素自然结晶时，透析外液中可加适宜防腐剂。
2.2.3 结晶毒素的保存
纯化毒素经自然结晶后，置2～8℃避光保存。
2.2.4 结晶毒素的检定
按3.1项进行。
2.3 半成品
2.3.1 配制
2.3.1.1 用PB溶解及透析毒素，除菌过滤后测定毒力。
2.3.1.2 用生理氯化钠溶液将已知毒力的毒素溶液稀释至适当浓度。
2.3.1.3 将适量的稀释毒素加入适宜稳定剂中，使每1ml中毒素毒力在规定范围内。
2.3.2 半成品检定
按3.2项进行。
2.4 成品
2.4.1 分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2 分装及冻干
应符合“生物制品分装冻干规程”规定。在冻干过程中制品温度应不高于35℃，真空或充氮封口。
2.4.3 规格
每瓶含A型肉毒毒素50～150U。
2.4.4 包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3 检定
3.1 结晶毒素检定
3.1.1 结晶毒素在普通光学显微镜高倍镜下观察，应呈均一的针状或棒状结晶。
3.1.2 毒力测定
可选择下列一种方法进行。结晶毒素毒力应为1.0×10〈5〉～1.0×10〈6〉LD50/ml。
3.1.2.1 本品溶解透析后做适当倍数稀释，按Broff法测定毒力，计算出本品的毒力。即取体重14～16g小鼠5只，每只尾静脉注射0.1ml本品(或稀释的供试品)，求其平均死亡时间(以分钟计)，从毒素剂量与死亡时间的标准曲线中求得毒素的毒力。
3.1.2.2 按常规方法稀释本品，各稀释度腹腔注射体重14～16g小鼠4只，每只注射0.5ml，根据动物4天内死亡情况，用统计学方法(Reed Muench法)计算本品的毒力。
3.1.3 纯度测定
3.1.3.1 根据波长280nm处吸光度计算的蛋白质浓度及3.1.2项测定的毒力，求出结晶毒素的纯度，每1mg蛋白质纯度应在1.0×10〈7〉LD50以上。
3.1.3.2 结晶毒素在波长260nm处吸光度与波长280nm处吸光度之比(A260/A280)应不高于0.6。
3.1.4 特异性检查
取注射用水1ml，溶解A、B、C、D、E、F型冻干肉毒诊断血清，分别于各血清管中加1ml含100LD50左右的本品。另取2支试管，各加1ml生理氯化钠溶液，再分别加入上述同浓度的本品溶液，其中1支煮沸20分钟作为毒素阴性对照，另1支与混有毒素的诊断血清管同时置37℃结合45分钟，作为毒素阳性对照。各组分别腹腔注射体重14～16g小鼠2～3只，每只注射0.5ml，观察4天，记录动物存亡情况。本品应为A型。
3.2 半成品检定
3.2.1 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
3.2.2 效价测定
按3.3.4项进行，应为标示量的80%～120%。
3.3 成品检定
除水分测定外，按标示量加入灭菌生理氯化钠溶液，复溶后进行以下检定。
3.3.1 鉴别试验
按3.1.4项进行，应符合规定。每批成品至少抽取1瓶做鉴别试验。
3.3.2 外观
应为白色疏松体，加入lml的生理氯化钠溶液后，轻轻摇动，复溶后呈无色或淡黄色澄明液体。
3.3.3 水分
应不高于3.0%(附录ⅦD)。
3.3.4 效价测定
取本品10～20瓶混合测定效价。每瓶加入1ml生理氯化钠溶液溶解，将等量混合的溶解毒素进行不同倍数稀释，各稀释度分别腹腔注射体重14～16g小鼠4只，每只注射0.5ml，观察4天，记录小鼠死亡数，用统计学方法计算每瓶本品的LD50(1LD50定为1U)。应为标示量的80%～120%。
3.3.5 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
3.3.6 稀释剂
稀释剂为氯化钠注射液。
4 保存、运输及有效期
于-5～-20℃避光保存和运输。自分装之日起有效期为3年。
5 使用说明
应符合“生物制品包装规程”规定。
