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药典2005版-注射用A型肉毒毒素

时间:2009-10-29 |来源:三九医药网 收集整理|点击:


    拼音名:Zhusheyong A Xing Roudu Dusu
    英文名:Botulinum Toxin Type A for Injection
    书页号:2005年版三部-201
    本品系用A型肉毒结晶毒素经稀释,加入稳定剂后冻干制成。
    1  基本要求
    生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
    2  制造
    2.1  菌种
    生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
    2.1.1  名称与来源
    生产用菌种为产毒力高的A型肉毒梭菌Hall株或其他A型肉毒梭菌。
    2.1.2  种子批的建立
    应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
    2.1.3  种子批的传代
    主种子批应不超过5代,工作种子批应不超过10代。
    2.1.4  种子批菌种的检定
    检定菌种可采用明胶琼脂半固体培养基、血琼脂平板培养基、乳糖卵黄琼脂平板培养基或其他适宜培养基。
    菌种应具有典型的形态、培养和生化特性,应产生不低于1.0×10〈5〉LD50/ml的A型肉毒毒素。
    2.1.5  种子批保存
    主种子批和工作种子批均应冻干保存于2~8℃;工作种子批也可用明胶琼脂半固体培养基于-20℃保存。
    2.2  结晶毒素
    2.2.1  原制毒素
    2.2.1.1  产毒培养基
    采用含胰酶消化酪蛋白、酵母透析液(或酵母浸出粉)、葡萄糖培养基,或经批准的其他适宜培养基。
    2.2.1.2  生产用种子接种产毒培养基后,在适宜温度培养一定时间。
    2.2.1.3  每瓶取样镜检,应无杂菌,经除菌过滤,即为原制毒素,其毒力应为10〈5〉~10〈6〉 LD50/ml。
    2.2.2  毒素纯化及结晶
    2.2.2.1  毒素可经等电点沉淀、核糖核酸酶处理、离子交换色谱、硫酸铵浓缩和透析及自然结晶等程序,或用经批准的其他适宜方法进行纯化。
    2.2.2.2  毒素自然结晶时,透析外液中可加适宜防腐剂。
    2.2.3  结晶毒素的保存
    纯化毒素经自然结晶后,置2~8℃避光保存。
    2.2.4  结晶毒素的检定
    按3.1项进行。
    2.3  半成品
    2.3.1  配制
    2.3.1.1  用PB溶解及透析毒素,除菌过滤后测定毒力。
    2.3.1.2  用生理氯化钠溶液将已知毒力的毒素溶液稀释至适当浓度。
    2.3.1.3  将适量的稀释毒素加入适宜稳定剂中,使每1ml中毒素毒力在规定范围内。
    2.3.2  半成品检定
    按3.2项进行。
    2.4  成品
    2.4.1  分批
    应符合“生物制品分批规程”规定。
    2.4.2  分装及冻干
    应符合“生物制品分装冻干规程”规定。在冻干过程中制品温度应不高于35℃,真空或充氮封口。
    2.4.3  规格
    每瓶含A型肉毒毒素50~150U。
    2.4.4  包装
    应符合“生物制品包装规程”规定。
    3  检定
    3.1  结晶毒素检定
    3.1.1  结晶毒素在普通光学显微镜高倍镜下观察,应呈均一的针状或棒状结晶。
    3.1.2  毒力测定
    可选择下列一种方法进行。结晶毒素毒力应为1.0×10〈5〉~1.0×10〈6〉LD50/ml。
    3.1.2.1  本品溶解透析后做适当倍数稀释,按Broff法测定毒力,计算出本品的毒力。即取体重14~16g小鼠5只,每只尾静脉注射0.1ml本品(或稀释的供试品),求其平均死亡时间(以分钟计),从毒素剂量与死亡时间的标准曲线中求得毒素的毒力。
    3.1.2.2  按常规方法稀释本品,各稀释度腹腔注射体重14~16g小鼠4只,每只注射0.5ml,根据动物4天内死亡情况,用统计学方法(Reed Muench法)计算本品的毒力。
    3.1.3  纯度测定
    3.1.3.1  根据波长280nm处吸光度计算的蛋白质浓度及3.1.2项测定的毒力,求出结晶毒素的纯度,每1mg蛋白质纯度应在1.0×10〈7〉LD50以上。
    3.1.3.2  结晶毒素在波长260nm处吸光度与波长280nm处吸光度之比(A260/A280)应不高于0.6。
    3.1.4  特异性检查
    取注射用水1ml,溶解A、B、C、D、E、F型冻干肉毒诊断血清,分别于各血清管中加1ml含100LD50左右的本品。另取2支试管,各加1ml生理氯化钠溶液,再分别加入上述同浓度的本品溶液,其中1支煮沸20分钟作为毒素阴性对照,另1支与混有毒素的诊断血清管同时置37℃结合45分钟,作为毒素阳性对照。各组分别腹腔注射体重14~16g小鼠2~3只,每只注射0.5ml,观察4天,记录动物存亡情况。本品应为A型。
    3.2  半成品检定
    3.2.1  无菌检查
    依法检查(附录ⅫA),应符合规定。
    3.2.2  效价测定
    按3.3.4项进行,应为标示量的80%~120%。
    3.3  成品检定
    除水分测定外,按标示量加入灭菌生理氯化钠溶液,复溶后进行以下检定。
    3.3.1  鉴别试验
    按3.1.4项进行,应符合规定。每批成品至少抽取1瓶做鉴别试验。
    3.3.2  外观
    应为白色疏松体,加入lml的生理氯化钠溶液后,轻轻摇动,复溶后呈无色或淡黄色澄明液体。
    3.3.3  水分
    应不高于3.0%(附录ⅦD)。
    3.3.4  效价测定
    取本品10~20瓶混合测定效价。每瓶加入1ml生理氯化钠溶液溶解,将等量混合的溶解毒素进行不同倍数稀释,各稀释度分别腹腔注射体重14~16g小鼠4只,每只注射0.5ml,观察4天,记录小鼠死亡数,用统计学方法计算每瓶本品的LD50(1LD50定为1U)。应为标示量的80%~120%。
    3.3.5  无菌检查
    依法检查(附录ⅫA),应符合规定。
    3.3.6  稀释剂
    稀释剂为氯化钠注射液。
    4  保存、运输及有效期
    于-5~-20℃避光保存和运输。自分装之日起有效期为3年。
    5  使用说明
    应符合“生物制品包装规程”规定。