药典2000版-门冬酰胺酶

时间:2009-10-28 |来源:三九中医药网 收集整理|点击:


    拼音名:Mendongxian’anmei
    英文名:Asparaginase
    书页号:2000年版二部-40

  本品系自埃希氏大肠杆菌(E.coli ASI.357)中提取制备的具有酰氨基水解作用的酶。按干燥品计算,每1mg蛋白含门冬酰胺酶效价不得低于250单位。

    【性状】 本品为白色结晶状粉末;无嗅,无味。
  本品在水中易溶,在乙醇和醚中不溶。

    【鉴别】 (1)取本品5mg,加水1ml使溶解,加20%氢氧化钠溶液5ml,摇匀,再加1%硫酸铜溶液1滴,摇匀,溶液呈蓝紫色。

  (2)取本品适量,加缓冲液(取浓缩胶缓冲液1.2ml、甘油1.0ml、10%十二烷基硫酸钠溶液2.0ml、0.5%溴酚蓝溶液0.5ml、β-巯基乙醇0.5ml、水4.8ml,混匀)制成每1ml中约含250单位的溶液,临用前置水浴中5分钟,放冷,作为供试品溶液;另取门冬酰胺酶对照品适量,同法的备,作为对照品溶液。分别取供试品溶液和对照品溶液各10μl,照电泳法(附录Ⅴ F第五法 考马斯亮蓝染色)试验,供试品主成分的迁移率应与对照品迁移率一致。

    【检查】 酸碱度 取本品,加水制成每1ml中含10mg的溶液,依法测定(附录Ⅵ H),pH值应为6.5~7.5。
  溶液的澄清度与颜色 取本品,加水制成每1ml中含5mg的溶液,溶液应澄清无色。
  纯度 取鉴别(2)项下的供试品溶液,将电泳后的凝胶板置薄层扫描仪上,在参比波长700nm、测定波长580nm处扫描,按峰面积归一化法计算主峰的相对百分含量,不得低于90.0%。
  干燥失重 取本品0.1g,置105℃干燥3小时,减失重量不得过5.0%(附录Ⅷ L)。
  重金属 取本品0.5g,依法检查(附录Ⅷ H第一法),含重金属不得过百万分之二十。
  异常毒性 取本品适量,加氯化钠注射液制成每1ml中含44000单位的溶液。取体重20±1g的雄性小白鼠5只,分别自尾静脉注射0.5ml,给药后30分钟内不得出现呼吸困难、抽搐症状。
  热原 取本品适量,加氯化钠注射液制成每1ml中含200单位的溶液,依法检查(附录Ⅺ D),剂量按家兔体重每1kg注射1ml,应符合规定。
  降压物质 取本品,依法检查(附录Ⅺ G),剂量按猫体重每1kg注射1万单位,应符合规定。

    【效价测定】  比活测定  对照溶液的制备  取经105℃干燥至恒重的硫酸铵适量,精密称定,加水制成0.001mol/L溶液。
  供试品溶液的制备 取本品约0.1g,精密称定,加0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH8.0)制成每1ml中约含门冬酰胺酶0.05mg的溶液。
  测定法 取试管3支(14×1.2cm),各加入0.33%门冬酰胺溶液1.9ml,于37℃水浴中预热3分钟,分别于第1管(t0)加入上述磷酸盐缓冲液0.1ml,第2、3管(t)各精密加入供试品溶液0.1ml,置37℃水浴中,准确反应15分钟,立即加入25%三氯醋酸溶液各0.5ml,摇匀,分别为空白反应液(t0)和反应液(t)。精密量取t0、t和对照溶液各0.5ml,置试管中,每份平行做2管,各加水7.0ml及碘化汞钾溶液(取碘化汞23g、碘化钾16g,加水至100ml,临用前与20%氢氧化钠溶液等体积混合)1.0ml,混匀,另取试管1支,加水7.5ml及碘化汞钾溶液1.0ml作为空白对照管,室温放置15分钟,于450nm的波长处,分别测定吸收度A0、At和As,计算平均值,按下式计算:
            (At-A0)×50×稀释倍数×F
   效价(单位/mg)=──────────────
             As×15×称样量(mg)

式中  50为反应常数;
    15为反应时间;
    F为对照溶液浓度的校正值。
  效价单位定义:一个门冬酰胺酶单位相当于在37℃±1℃时每分钟分解门冬酰胺产生1μmol氨所需的酶量。
  蛋白质含量 取本品约20mg,精密称定,照氮测定法(附录Ⅶ D第二法)测定,将结果乘以6.25,计算每1mg供试品中蛋白质含量。

  比活 按下式计算:
            每1mg供试品的效价(单位)
        比活=─────────────
            每1mg供试品中蛋白量(mg)

    【类别】 抗肿瘤药。

    【贮藏】 遮光,密封,冷处保存。

    【制剂】 注射用门冬酰胺酶