药典2000版-门冬酰胺酶

时间：2009-10-28 |来源：三九中医药网 收集整理|点击：次


    拼音名：Mendongxian’anmei
    英文名：Asparaginase
    书页号：2000年版二部－40

　　本品系自埃希氏大肠杆菌(E.coli ASI.357)中提取制备的具有酰氨基水解作用的酶。按干燥品计算，每1mg蛋白含门冬酰胺酶效价不得低于250单位。

    【性状】　本品为白色结晶状粉末；无嗅，无味。
　　本品在水中易溶，在乙醇和醚中不溶。

    【鉴别】　(1)取本品5mg，加水1ml使溶解，加20％氢氧化钠溶液5ml，摇匀,再加1％硫酸铜溶液1滴，摇匀，溶液呈蓝紫色。

　　(2)取本品适量，加缓冲液（取浓缩胶缓冲液1.2ml、甘油1.0ml、10％十二烷基硫酸钠溶液2.0ml、0.5％溴酚蓝溶液0.5ml、β-巯基乙醇0.5ml、水4.8ml，混匀）制成每1ml中约含250单位的溶液，临用前置水浴中5分钟，放冷，作为供试品溶液；另取门冬酰胺酶对照品适量，同法的备，作为对照品溶液。分别取供试品溶液和对照品溶液各10μl，照电泳法（附录Ⅴ F第五法　考马斯亮蓝染色）试验，供试品主成分的迁移率应与对照品迁移率一致。

    【检查】　酸碱度　取本品，加水制成每1ml中含10mg的溶液，依法测定(附录Ⅵ　Ｈ)，pH值应为6.5～7.5。
　　溶液的澄清度与颜色　取本品，加水制成每1ml中含5mg的溶液，溶液应澄清无色。
　　纯度　取鉴别（2）项下的供试品溶液，将电泳后的凝胶板置薄层扫描仪上，在参比波长700nm、测定波长580nm处扫描，按峰面积归一化法计算主峰的相对百分含量，不得低于90.0％。
　　干燥失重　取本品0.1g，置105℃干燥3小时，减失重量不得过5.0％(附录Ⅷ Ｌ)。
　　重金属　取本品0.5g，依法检查(附录Ⅷ Ｈ第一法),含重金属不得过百万分之二十。
　　异常毒性　取本品适量，加氯化钠注射液制成每1ml中含44000单位的溶液。取体重20±1g的雄性小白鼠5只,分别自尾静脉注射0.5ml,给药后30分钟内不得出现呼吸困难、抽搐症状。
　　热原　取本品适量，加氯化钠注射液制成每1ml中含200单位的溶液，依法检查（附录Ⅺ Ｄ），剂量按家兔体重每1kg注射1ml，应符合规定。
　　降压物质　取本品，依法检查（附录Ⅺ Ｇ）,剂量按猫体重每1kg注射1万单位，应符合规定。

    【效价测定】　 比活测定　 对照溶液的制备　 取经105℃干燥至恒重的硫酸铵适量，精密称定，加水制成0.001mol/L溶液。
　　供试品溶液的制备　取本品约0.1g，精密称定，加0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH8.0)制成每1ml中约含门冬酰胺酶0.05mg的溶液。
　　测定法　取试管3支(14×1.2cm)，各加入0.33％门冬酰胺溶液1.9ml,于37℃水浴中预热3分钟,分别于第1管(t0)加入上述磷酸盐缓冲液0.1ml，第2、3管(t)各精密加入供试品溶液0.1ml,置37℃水浴中,准确反应15分钟，立即加入25％三氯醋酸溶液各0.5ml,摇匀，分别为空白反应液(t0)和反应液(t)。精密量取t0、t和对照溶液各0.5ml，置试管中,每份平行做2管，各加水7.0ml及碘化汞钾溶液(取碘化汞23g、碘化钾16g，加水至100ml，临用前与20％氢氧化钠溶液等体积混合)1.0ml，混匀，另取试管1支，加水7.5ml及碘化汞钾溶液1.0ml作为空白对照管，室温放置15分钟，于450nm的波长处，分别测定吸收度A0、At和As，计算平均值，按下式计算：
　　　　　　　　　　　　(At-A0)×50×稀释倍数×F
　　　效价(单位/mg)＝──────────────
　　　　　　　　　　　　　As×15×称样量(mg)

式中　　50为反应常数；
　　　　15为反应时间；
　　　　F为对照溶液浓度的校正值。
　　效价单位定义：一个门冬酰胺酶单位相当于在37℃±1℃时每分钟分解门冬酰胺产生1μmol氨所需的酶量。
　　蛋白质含量　取本品约20mg，精密称定，照氮测定法（附录Ⅶ　Ｄ第二法）测定，将结果乘以6.25,计算每1mg供试品中蛋白质含量。

　　比活　按下式计算：
　　　　　　　　　　　　每1mg供试品的效价（单位）
　　　　　　　　比活＝─────────────
　　　　　　　　　　　　每1mg供试品中蛋白量（mg）

    【类别】　抗肿瘤药。

    【贮藏】　遮光，密封，冷处保存。

    【制剂】　注射用门冬酰胺酶