拼音名：Pishang Huahenyong Shuyi Huoyimiao
英文名：Plague Vaccine(LiVe)for Percutaneous Scarification
书页号：2005年版三部-40
本品系用鼠疫杆菌的弱毒菌株经培养后收集菌体，加入稳定剂冻干制成。用于预防鼠疫。
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2 制造
2.1 菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.1 菌种名称及来源
采用鼠疫杆菌弱毒菌株EV株。
2.1.2 种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.3 种子批的传代
工作种子批菌种启开后，第2～3代菌种用于生产，不得用第4代菌种生产。
2.1.4 种子批菌种的检定
2.1.4.1 培养特性及染色镜检
在琼脂平皿上，35～37℃培养44～48小时之菌落应为粗糙型，在肉汤培养基的液面有薄菌膜，管底有沉淀物，肉汤透明。涂片染色镜检，为革兰阴性杆菌。
2.1.4.2 生化特性
发酵葡萄糖，产酸不产气；石蕊牛乳轻度变红；在甘油培养基内不产酸不产气(附录ⅥV)。
2.1.4.3 噬菌体裂解试验
将EV菌种涂于琼脂平皿上，加入稀释度为10〈-6〉以上的鼠疫噬菌体1滴，于28℃培养44～48小时，噬菌体流过处应无本菌生长。
2.1.4.4 特异性毒性试验
选用体重300～400g豚鼠3只，每只皮下注射含菌1.2×10〈10〉(于28～30℃培养44～48小时)的培养物。在注射后第6天解剖1只，第21天解剖2只。肉眼检查注射部位、脾、肝和肺，并用脾、肝、肺及心血进行培养，其中心血和肺经培养应无本菌生长。肉眼检查病变，注射部位可见充血，浸润变为脓疡，肝和脾可有丘疹状结节，肺部不应有鼠疫特异病变为合格。肺部如有显著病变时，应用同数量豚鼠复试，若仍有显著病变时，菌种应废弃。
2.1.4.5 免疫力试验
选用体重200～250g的豚鼠10只，每只皮下注射含菌7.0×10〈9〉(于28～30℃培养44～48小时)的培养物，于20～25天后进行攻击，每只皮下感染鼠疫强毒菌200MLD。同时用3组豚鼠作对照，每组3只，各组豚鼠分别皮下注射0.5MLD、1MLD及2MLD)的毒菌。免疫组及对照组至少观察25天。免疫动物存活不少于8只；而对照动物注射O.5MLD部分死亡，注射1MLD或2MLD全部死亡时，免疫力试验为合格。
2.1.5 种子批保存
菌种应冻干，于2～8℃避光保存。
2.2 原液
2.2.1 生产用种子
2.2.1.1第1代菌种
将工作种子批菌种启开后，接种于厚金格尔琼脂培养基上，于28～30℃培养44～48小时为第1代，置2～8℃保存可使用15天。
2.2.1.2 第2代菌种
用生理氯化钠溶液将第1代菌种洗下，接种足够量的种子瓶，于28～30℃培养44～48小时为第2代。由此制备适宜数量的生产用种子供生产用。
2.2.1.3 第3代菌种
在第2代菌种不够的情况下，用生理氯化钠溶液将第2代菌种洗下，接种足够量的种子瓶，于28～30℃培养44～48小时为第3代。由此制备适宜数量的生产用种子供生产用。
2.2.2 生产用培养基
可采用厚金格尔琼脂培养基(pH6.8～7.2)或经批准的其他培养基。
2.2.3 菌种接种和培养
第2～3代菌种经肉眼检查无杂菌后，加入适量生理氯化钠溶液洗下菌苔，制成均匀的菌悬液，用此菌悬液接种培养瓶，于28～30℃培养44～48小时后，逐瓶肉眼检查，有杂菌者废弃。
2.2.4 采集合并
用由蔗糖、明胶、硫脲、味精及尿素组成的稳定剂洗下菌苔(洗菌前将凝固水倒去)或将菌苔刮入上述稳定剂内，进行纯菌试验，合格后方可合并制成原液。
2.2.5 原液检定
按3.1项进行。
2.3 半成品
2.3.1 配制
根据3.1.2项测定的原液浓度，用稳定剂稀释至每1次人用剂量含菌7.OXl0〈8〉～9.O×10〈8〉。
2.3.2 半成品检定
按3.2项进行。
2.4 成品
2.4.1 分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2 分装与冻干
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。分装后应立即冻干，可真空封口，亦可充氮封口。
2.4.3 规格
每瓶10次人用剂量含菌8.O×10〈9〉、20次人用剂量含菌1.6X10〈10〉。每1次人用剂量含活菌数应大于3.6X10〈8〉。
2.4.4 包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3 检定
3.1 原液检定
3.1.1 纯菌检查
按附录ⅫA方法做纯菌检查，生长物做涂片镜检，应符合鼠疫EV菌株特征，不得有杂菌。
3.1.2 浓度测定
按“中国细菌浊度标准”测定。
3.2 半成品检定
按附录ⅫA方法做纯菌检查，生长物做涂片镜检，应符合鼠疫杆菌EV株特征，不得有杂菌。
3.3 成品检定
除水分测定外，按标示量加入氯化钠注射液复溶后，进行其余各项检定。
3.3.1 鉴别试验
按2.1.4.3项进行。
3.3.2 外观
应为白色或淡黄色疏松体，按标示量加入生理氯化钠溶液后，应在半分钟内复溶，并呈均匀悬液。
3.3.3 水分
应不高于3.O％(附录ⅦD)。
3.3.4 纯菌检查
按附录ⅫA方法做纯菌检查，生长物做涂片镜检，应符合鼠疫EV菌株特征，不得有杂菌。
3.3.5 菌落和菌形检查
应呈典型粗糙型菌落，涂片染色镜检，为革兰阴性杆菌。
3.3.6 浓度测定
按“中国细菌浊度标准”测定浓度。每1次人用剂量含菌数为7.0×10〈8〉～9.0×10〈8〉。
3.3.7 活菌数测定
取本品3瓶，混匀并稀释至菌数为1.0×10〈3〉/ml，接种5个平皿，每个平皿接种0.1ml。均匀涂抹后置28～30℃培养2～3天。每1次人用剂量活菌数应大于3.6×10〈8〉。
3.3.8 效力测定
取每5批疫苗中的首批进行效力测定。用体重250～300g豚鼠10只，每只皮下注射含菌5.0×10〈7〉，注射后20～25天以200MLD的鼠疫毒菌进行皮下攻击。同时有3组豚鼠作对照，每组3只，分别于各组豚鼠皮下注射0.5MLD、1MLD和2MLD。各组动物于注射后，观察25天。免疫动物存活不少丁8只；而对照组动物注射0.5MLD部分死亡，注射1MLD或2MLD全部死亡时，效力测定为合格。
3.3.9 特异性毒性检查
取体重250～350g豚鼠2只，每只皮下注射含菌1.2×10〈lo〉的本品，第6天称体重，体重减轻应不超过20％，并取其中1只解剖，另1只观察到21天解剖。检查项目及要求同2.1.4.4 项。
3.3.10 稀释剂
稀释剂为氯化钠注射液。
4 保存、运输及有效期
于2～8℃避光保存和运输，自成品活菌数测定合格之日起有效期为1年。
5 使用说明
皮上划痕用鼠疫活疫苗使用说明
【药品名称】
通用名称：皮上划痕用鼠疫活疫苗
英文名称：Plague Vaccine(Live)for Percutaneous Scarification
汉语拼音：Pishang Huahenyong Shuyi Huoyimiao
【成分和性状】本品系用鼠疫菌弱毒菌株经培养后收集菌体，加入稳定剂冻干制成。为白色或淡黄色疏松体，复溶后为均匀悬液。
【接种对象】疫区或通过疫区的人员。
【作用与用途】接种本疫苗后，可使机体产生免疫应答。用于预防鼠疫。
【规格】每瓶10次人用剂量含菌8.0×10〈9〉或20次人用剂量含菌1.6×10〈10〉。每1次人用剂量含活菌数应大于3.6×10〈8〉。
【用法用量】(1)按标示量加入氯化钠注射液溶解。每瓶20次人用剂量者加入1.0ml，10次人用剂量者加入0.5ml，复溶后的疫苗应在3小时内用完。
(2)在上臂外侧三角肌上部附着处皮上划痕接种。在接种部位上滴加疫苗，每1次人用剂量0.05ml。用消毒针划成“井”字，划痕长度约1～1.5cm，应以划破表皮稍见血迹为宜。划痕处用针涂压10余次，使菌液充分进入划痕内。接种后局部应裸露至少5分钟。
(3)14周岁以下儿童，疫苗滴于两处划2个“井”字，14周岁以上者疫苗滴于三处划3个“井”字。“井”字间隔2～3cm。
(4)接种人员每年应免疫1次。
【不良反应】接种后反应轻微，少数人划痕处会出现浸润，一般不影响活动，个别人体温可能稍有升高，一般可自行消退。
【禁忌】 (1)患严重疾病、免疫缺陷症及用免疫抑制剂治疗者。
(2)妊娠期或6个月内的哺乳期妇女。
【注意事项】(1)本品仅供皮上划痕用，严禁注射!
(2)开启疫苗瓶和接种时，切勿使消毒剂接触疫苗。
(3)疫苗瓶有裂纹或标签不清者，均不得使用。
【贮藏】于2～8℃避光保存和运输。
【包装】
【有效期】1年。
【执行标准】
【批准文号】
【生产企业】
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