拼音名：Pishang Huahen Renyong Tanju Huoyimiao
英文名：Anthrax Vaccine(Live)for Percutaneous ScarificatiOn
书页号：2005年版三部- 43
本品系用炭疽芽孢杆菌的弱毒菌株经培养、收集菌体后稀释制成的活菌悬液。用于预防炭疽。
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
炭疽疫苗生产车间必须与其他生物制品生产车间及实验室分开。所需设备及器具均须单独设置并专用。
2 制造
2.1 菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.1 名称及来源
采用无荚膜、水肿型，具有一定残余毒力的炭疽芽孢杆菌弱毒菌株CMCC 63001(A1 6R)。
2.1.2 种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.3 种子批菌种的检定
每3～5年应对菌种培养特性、残余毒力、特异性毒性及免疫力进行全面检定。生产前应检查菌形、培养特性及噬菌体特异性。
2.1.3.1 培养及生化特性
在牛肉消化液琼脂或其他适宜固体培养基上生长，菌落为灰白色、不透明、呈卷发状。为革兰阳性大杆菌，呈链状排列，可形成芽孢。液体培养呈絮状发育，在血清培养基上不形成荚膜，无动力。能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，不分解水杨苷(附录ⅪV)。
2.1.3.2 残余毒力试验
用体重350～400g豚鼠5只，各皮下注射含菌5.0×10〈7〉/m1的菌悬液lml。另用体重18～20g小鼠5只，各皮下注射含菌5.0×10〈7〉/ml的菌悬液0.1ml。观察10天，可有特异死亡，但脏器涂片应仅找到无荚膜的本菌。应有部分动物出现水肿，若全部动物不出现水肿，应复试，复试仍无水肿，菌种不得用于生产。
2.1.3.3 特异性毒性试验
用体重2.0～2.5kg家兔10只，各皮下注射含菌2.5×10〈8〉/ml的菌悬液1ml，观察10天，在注射部位可出现水肿，全部动物应存活。如有死亡，应用同数量动物复试，复试仍有死亡，菌种不得用于生产。
2.1.3.4 免疫力试验
用体重2.O～2.5kg家兔10只，各皮下注射含菌2.5×10〈8〉/ml的菌悬液1ml，于注射后18～20天，用炭疽毒菌攻击，各皮下注射20MLD。同时用同体重的家兔3只，各皮下注射1MLD毒菌作为对照。观察10天，对照动物应全部死亡，试验组保护率60％为合格。
2.1.3.5 噬菌体特异性试验
用平皿法检查，接种菌液后，加入工作浓度的炭疽噬菌体1滴，置33～34℃培养后，在滴噬菌体处应无本菌生长。
2.1.4 种子批的保存
菌种应冻干或用50％甘油溶液保存于2～8℃。
2.2 原液
2.2.1 生产用种子
将工作种子批启开后，接种于牛肉消化液琼脂或其他适宜培养基，置33～34℃培养18～20小时，经检查为纯菌者，保存于2～8℃，2周内使用。
2.2.2 生产用培养基
采用牛肉汁琼脂(pH7.2～7.4)或经批准的其他培养基。
2.2.3 菌种接种和培养
将生产用种子移种于牛肉消化液中，置33～34℃培养18～24小时，检查其生长特性、菌形及纯度，应符合2.1.3.1项要求。
经检查合格之种子培养物，接种于牛肉消化液琼脂，置33～34℃培养。成熟的典型芽孢应达80％以上，无杂菌者可采集。
2.2.4 采集
将培养物刮入50％甘油溶液内，振摇使成均匀悬液。每瓶取样做纯菌检查(附录ⅫA)，生长物做涂片镜检，应符合炭疽芽孢杆菌CMCC 63001(A16R)株特征，不得有杂菌。
2.2.5 合并
将纯菌检查合格之原液进行合并分批。
2.2.6 原液检定
按3.1项进行。
2.3 半成品
2.3.1 配制
用灭菌的50％甘油溶液将原液稀释成每1m1含菌4.0×10〈9〉。
2.3.2 半成品检定
按3.2项进行。
2.4 成品
2.4.1 分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2 分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.4.3 规格
每瓶0.5ml(10次人用剂量)含菌2.0×10〈9〉，lml(20次人用剂量)含菌4.0×10〈9〉。
2.4.4 包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3 检定
3.1 原液检定
3.1.1 纯菌检查
按附录ⅫA方法做纯菌检查，生长物做涂片镜检，应符合炭疽芽孢杆菌CMCC 63001(A16R)株特征，不得有杂菌。
3.1.2 浓度测定
按“中国细菌浊度标准”测定浓度，每lml含菌3.2×10〈9〉～4.8×10〈9〉。
3.2 半成品检定
纯菌检查
按附录ⅫA方法做纯菌检查，生长物做涂片镜检，应符合炭疽芽孢杆菌CMCC 63001(A16R)株特征，不得有杂菌。
3.3 成品检定
3.3.1 鉴别试验
按2.1.3.5进行。
3.3.2 外观
应为灰白色均匀悬液，无摇不散的菌块及异物。
3.3.3 纯菌检查
按附录ⅫA方法做纯菌检查，生长物做涂片镜检，应符合炭疽芽孢杆菌CMCC 63001(A16R)株特征，不得有杂菌。
3.3.4 浓度测定
按“中国细菌浊度标准”测定浓度，应为每lml含菌3.2×10〈9〉～4.8×10〈9〉。
3.3.5 活菌数测定
取本品3瓶，混匀并稀释至菌数为1.0×10〈3〉/ml，接种5个平皿，每个平皿接种0.1ml。均匀涂抹后置35～37℃培养24小时，每1次人用剂量的活菌数应大于1×10〈8〉。
3.3.6 效力测定
取每5批疫苗中的首批按2.1.3.4项进行效力测定。
3.3.7 特异性毒性检查
用体重2.0～2.5kg家兔5只，各皮下注射含菌2.5×10〈8〉/ml的菌悬液1ml，观察10天，注射部位可有水肿，动物应全部存活。如有死亡，应用加倍量动物复试。如仍有死亡，判为不合格。
4 保存、运输及有效期 于2～8℃避光保存和运输。自成品活菌数测定合格之日起有效期为2年。
5 使用说明
皮上划痕人用炭疽活疫苗使用说明
【药品名称】
通用名称：皮上划痕人用炭疽活疫苗
英文名称：Anthrax Vaccine(Live)for Percutaneous Scarification
汉语拼音：Pishang Huahen Renyong Tanju Huoyimiao。
【成分和性状】本品系用炭疽芽孢杆菌的弱毒株经培养、收集菌体后稀释制成。为灰白色均匀悬液。
【接种对象】炭疽常发地区人群，皮毛加工与制革工人、放牧员以及其他与牲畜密切接触者。
【作用与用途】接种本疫苗后，可使机体产生免疫应答。用于预防炭疽。
【规格】每瓶0.5ml(10次人用剂量)含菌2.0×10〈9〉，lml(20次人用剂量)含菌4.0×10〈9〉。
【用法用量】(1)在上臂外侧三角肌附着处皮上划痕接种。用消毒注射器吸取疫苗，在接种部位滴2滴，间隔3～4cm，划痕时用手将皮肤绷紧，用消毒划痕针在每滴疫苗处作“井”字划痕，每条痕长约1～1.5cm。划破表皮以出现间断小血点为度。
(2)用同一划痕针反复涂压，使疫苗充分进入划痕处。接种后局部至少应裸露5～10分钟，然后用消毒干棉球擦净。
(3)接种后24小时划痕部位无任何反应者应重新接种。
【不良反应】接种后局部可出现微红，不需处理；极个别者可出现低热，但能自行消退。如出现持续性体温升高，而局部出现脓肿者，应做对症处理。
【禁忌】(1)患严重疾病、严重皮肤病者。
(2)有免疫缺陷症及接受免疫抑制剂治疗者。
(3)有严重过敏史者。
【注意事项】(1)本品仅供皮上划痕用，严禁注射!
(2)开启疫苗瓶和接种时，切勿使消毒剂接触疫苗。
(3)疫苗有摇不散的菌块或疫苗瓶有裂纹者，均不得使用。
(4)用前应将疫苗充分摇匀。消毒皮肤只可用酒精，不可用碘酒。
(5)疫苗瓶开启后，应于3小时内用完，剩余的疫苗应废弃。
(6)剩余疫苗、空疫苗瓶及用具，需用3％碱水煮沸消毒30分钟。
(7)严禁冻结。
【贮藏】于2～8℃避光保存和运输。
【包装】
【有效期】2年。
【执行标准】
【批准文号】
【生产企业】
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