药典2000版-胰蛋白酶

时间：2009-10-28 |来源：三九中医药网 收集整理|点击：次


    拼音名：Yidanbaimei
    英文名：Trypsin
    书页号：2000年版二部－734
    
　　本品系自牛、羊或猪胰中提取的蛋白水解酶。按干燥品计算，每1mg 的效价不得少于2500单位。

    【性状】　本品为白色或类白色结晶性粉末。

    【鉴别】　取本品约2mg ，置白色点滴板上，加对甲苯磺酰-L- 精氨酸甲酯盐酸盐试液0.2ml ，摇匀，即显紫色。

    【检查】　酸度　取本品，加水制成每1ml 中含2mg 的溶液，依法测定（附录Ⅵ H），pH值应为5.0 ～7.0 。
　　溶液的澄清度　取本品，加0.9 ％氯化钠溶液制成每1ml 中含10mg的溶液，溶液应澄清。
　　糜蛋白酶　底物溶液的制备　取N-乙酰 -L-酪氨酸乙酯23.7mg，置 100ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液（取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液38.9ml与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液61.1ml混合，pH值为7.0 ）50ml，温热使溶解，冷却后再稀释至刻度，摇匀。冰冻保存，但不得反复冻融。
　　供试品溶液的制备　精密称取本品适量，用0.001mol/L盐酸溶液制成每1ml 中含0.25mg的溶液。
　　测定法　取底物溶液2.0ml 、0.001mol/L盐酸溶液0.2ml 与上述磷酸盐缓冲液（pH7.0 ）1ml 混匀，作为空白。取供试品溶液0.2ml 与底物溶液（预热至25℃±0.5℃）
3.0ml ，立即计时并摇匀，使比色池内的温度保持在25℃±0.5 ℃，照分光光度法（附录Ⅳ A），在237nm 的波长处，每隔30秒读取吸收度，共5 分钟，每30秒钟吸收度的变化率应恒定，且恒定时间不得少于3 分钟。以吸收度为纵坐标，时间为横坐标，作图，取在3 分钟内成直线部分的吸收度，按下式计算。
　　　　　　　　Ａ2 －Ａ1　　　　　 2500
　　　　Ｐ＝────────×──────────
　　　　　　　　 0.0075Ｔ　　 Ｗ×供试品效价 (u/mg)

式中　Ｐ为每2500胰蛋白酶单位中含糜蛋白酶的量，单位；
　　　Ａ2 为直线上开始的吸收度；
　　　Ａ1 为直线上终止的吸收度；
　　　Ｔ为Ａ2 至Ａ1 读数的时间，分；
　　　Ｗ为测定液中含供试品的量，mg；
　　　0.0075为在上述条件下，吸收度每分钟改变0.0075，即相当于1个糜蛋白酶单位。
　　　 每2500单位胰蛋白酶中不得多于50单位的糜蛋白酶。
　　干燥失重　取本品适量，以五氧化二磷为干燥剂，在60℃减压干燥4 小时，减失重量不得过5.0 ％（附录Ⅷ L）。

    【效价测定】　底物溶液的制备　取N-苯甲酰 -L-精氨酸乙酯盐酸盐85.7mg，加水溶解使成100ml ，作为底物原液；取10ml，用磷酸盐缓冲液（取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液13ml与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液87ml混合，pH值为7.6 ）稀释成100ml ，照分光光度法（附录Ⅳ A），恒温于25.0℃±0.5℃，以水作空白，在253nm 的波长处测定吸收度，必要时可用上述底物原液或磷酸盐缓冲液调节，使吸收度在0.575 ～0.585 之间，作为底物溶液。制成后应在2 小时内使用。
　　供试品溶液的制备　精密称取本品适量，用0.001mol/L盐酸溶液溶解并制成每1ml中含50～60胰蛋白酶单位的溶液。
　　测定法　取底物溶液3.0ml ，加0.001mol/L盐酸溶液200μl ，混匀，作为空白。另取供试品溶液200μl 加底物溶液（恒温于25.0℃±0.5℃）3.0ml，立即计时，混匀，使比色池内的温度保持在25℃±0.5℃，照分光光度法（附录Ⅳ A），在253nm 的波长处，每隔30秒钟读取吸收度，共5 分钟。以吸收度为纵坐标，时间为横坐标，作图；每30秒钟吸收度的改变应恒定在0.015 ～0.018 之间，呈线性关系的时间不得少于3 分钟。若不符合上述要求，应调整供试品溶液的浓度，再作测定。在上述吸收度对时间的关系图中，取在呈直线上的吸收度，按下式计算：
　　　　　　Ａ1－Ａ2
　　Ｐ＝──────────
　　　　　　0.003ＴＷ

式中　　Ｐ为每1mg 供试品中含胰蛋白酶的量，单位；
　　　　Ａ1 为直线上终止的吸收度；
　　　　Ａ2 为直线上开始的吸收度；
　　　　Ｔ为Ａ1 至Ａ2 读数的时间，分；
　　　　Ｗ为测定液中含供试品的量，mg；
　　　　0.003为在上述条件下，吸收度每分钟改变0.003 ，即相当于1 个胰蛋白酶单位。

    【类别】　蛋白分解酶。

    【贮藏】　避光、密闭，在阴凉干燥处保存。

    【制剂】　注射用胰蛋白酶