拼音名：Pinei Zhusheyong Kajiemiao
英文名：BCG Vaccine for Intradermal lnjection
书页号：2005年版三部-49
本品系用卡介菌经培养后，收集菌体，加入稳定剂冻干制成。用于预防结核病。
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
卡介苗生产车间必须与其他生物制品生产车问及实验室分开。所需设备及器具均须单独设置并专用。卡介苗制造、包装及保存过程均须避光。
从事卡介苗制造的工作人员及经常进入卡介苗制造室的人员，必须身体健康，经Ⅹ射线检查无结核病，且每年经Ⅹ射线检查l～2次，可疑者应暂离卡介苗的制造。
2 制造
2.1 菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。
2.1.1 名称及来源
生产用菌种为卡介菌D〈［2］〉PB302菌株。严禁使用通过动物传代的菌种制造卡介苗。
2.1.2 种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。
2.1.3 种子批的传代
工作种子批至单批收获培养物的总传代数不得超过12代。
2.1.4 种子批菌种的检定
2.1.4.1 培养特性
卡介菌在苏通培养基上生长良好，培养温度在37～39℃之间。抗酸染色应为阳性。在苏通马铃薯培养基上培养的卡介菌应是干皱成团略呈浅黄色。在牛胆汁马铃薯培养基上为浅灰色黏膏状菌苔。在鸡蛋培养基上有突起的皱型和扩散型两类菌落，且带浅黄色。在苏通培养基上卡介菌应浮于表面，为多皱、微带黄色的菌膜。
2.1.4.2 毒力试验
用结核菌素纯蛋白衍生物皮肤试验(皮内注射0.2ml，含10IU)阴性、体重300～400g的同性豚鼠4只，各腹腔注射1ml菌液(5mg/m1)，每周称体重，观察5周动物体重不应减轻；同时解剖检查，大网膜上可出现脓疱，肠系膜淋巴结及脾可能肿大，肝及其他脏器应无肉眼可见的病变。
2.1.4.3 无有毒分枝杆菌试验
用结核菌素纯蛋白衍生物皮肤试验(皮内注射0.2ml，含10IU)阴性、体重300～400g的同性豚鼠6只，于股内侧皮下各注射lml菌液(10mg/m1)，注射前称体重，注射后每周观察1次注射部位及局部淋巴结的变化，每2周称体重1次，豚鼠体重不应降低。6周时解剖3只豚鼠，满3个月时解剖另3只，检查各脏器应无肉眼可见的结核病变。若有可疑病灶时，应做涂片和组织切片检查，并将部分病灶磨碎，加少量生理氯化钠溶液混匀后，由皮下注射2只豚鼠，若证实系结核病变，该菌种即应废弃。当试验未满3个月时，豚鼠死亡则应解剖检查，若有可疑病灶，即按上述方法进行，若证实系结核病变。该菌种即应废弃。若证实属非特异性死亡，且豚鼠多死亡1只以上时应复试。
2.1.4.4 免疫力试验
用种子批菌种制备疫苗，经皮下免疫体重300～400g豚鼠4只，每只注射0.2ml(1/10人用剂量)，对照组注射0.2ml生理氯化钠溶液。豚鼠免疫后4～5周，经皮下攻击10〈3〉～10〈4〉强毒人型结核分枝杆菌，攻击后5～6周解剖动物，免疫组与对照组动物的病变指数及脾脏毒菌分离数的对数值经统计学处理，应有显著差异。
2.1.5 种子批保存
冻干菌种于2～8℃保存。
2.2 原液
2.2.1 培养基
生产用培养基为苏通马铃薯培养基、胆汁马铃薯培养基或液体苏通培养基。
2.2.2 生产用种子
启开工作种子批菌种，在苏通马铃薯培养基、胆汁马铃薯培养基或液体苏通培养基上每传1次为1代。在马铃薯培养基培养的菌种置冰箱保存，不得超过2个月。
2.2.3 菌种接种与培养
挑取生长良好的菌膜，移种于改良苏通综合培养基或经批准的其他培养基的表面，置37℃静止培养。
2.2.4 原液收集和合并
培养结束后，应逐瓶检查，若有污染、湿膜、浑浊等情况应废弃。收集菌膜压干，移入盛有不锈钢珠瓶内，钢珠与菌体的比例应根据研磨机转速控制在一适宜的范围，并尽可能在低温下研磨。加入适量无致敏原稳定剂稀释，制成原液。
2.2.5 原液检定
按3.1项进行。
2.3 半成品
2.3.1 配制
用稳定剂将原液稀释成1.0mg/m1或0.5mg/m1，即为半成品。
2.3.2 半成品检定
按3.2项进行。
2.4 成品
2.4.1 分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2 分装与冻干
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。分装过程中务使疫苗混合均匀。疫苗分装后应立即冻干，冻干后应立即封口。
2.4.3 规格
每瓶10次人用剂量含卡介菌0.5mg、5次人用剂量含卡介菌0.25mg。每lmg卡介菌含活菌数应不低于1.0X 10〈6〉CFU。
2.4.4 包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3 检定
3.1 原液检定
3.1.1 纯菌检查
按附录ⅫA的方法进行，生长物做涂片镜检，不得有杂菌。
3.1_2 浓度测定
用国家药品检定机构分发的冻干卡介苗参考比浊标准，以分光光度法或其他方法测定原液浓度。
3.2 半成品检定
3.2.1 纯菌检查
按附录ⅫA的方法进行，生长物做涂片镜检，不得有杂菌。
3.2.2 浓度测定
按3.1.2项进行。
3.2.3 活菌数测定
应不低于1.0×10〈7〉CFU/mg。
3.3 成品检定
除水分测定、活菌数测定和热稳定性试验外，按标示量加入灭菌注射用水，复溶后进行其余各项检定。
3.3.1 鉴别试验
应做抗酸染色涂片检查，细菌形态与特性应符合卡介菌特征。
3.3.2 外观
应为白色疏松体或粉末状，按标示量加入注射用水，应在3分钟内复溶呈均匀悬液。
3.3.3 水分
应不高于3.0％(附录ⅦD)。
3.3.4 纯菌检查
按附录ⅫA的方法进行，生长物做涂片镜检，不得有杂菌。
3.3.5 效力测定
用结核菌素纯蛋白衍生物皮肤试验(皮内注射0.2ml，含10IU)阴性、体重300～400g的同性豚鼠4只，每只皮下注射0.5mg供试品，注射5周后皮内注射TB-PPD 10IU/0.2ml，并于24小时后观察结果，局部硬结反应直径应不小于5mm。
3.3.6 活菌数测定
每亚批疫苗均应做活菌数测定。抽取5支疫苗稀释并混合后进行测定，培养4周后含活菌数应不低于1.0×10〈6〉CFU/mg。本试验可与热稳定性试验同时进行。
3.3.7 无有毒分枝杆菌试验
选用结核菌素纯蛋白衍生物皮肤试验(皮内注射O．2ml，含10IU)阴性、体重300～400g的同性豚鼠6只，每只皮下注射相当于50次人用剂量的供试品，每2周称体重一次，观察6周，动物体重不应减轻；同时解削检查每只动物，若肝、脾、肺等脏器无结核病变，即为合格。若动物死亡或有可疑病灶时，应按2.1.4.3项进行。
3.3.8热稳定性试验
取每亚批疫苗于37℃放置28天测定活菌数，并与4℃保存的同批疫苗进行比较，计算活菌率；放置37℃的本品活菌数应不低于置4℃本品的25％，且不低于2·O×10 <5> CFU／mg。每一机柜冻干疫苗应抽样进行此项试验。
3.3.9稀释剂
稀释剂为灭菌注射用水。
4 保存、运输及有效期
于2～8℃避光保存和运输。自分装之日起，按批准的有效期执行。
5 使用说明
皮内注射用卡介苗使用说明
【药品名称】
通用名称：皮内注射用卡介苗
英文名称：BCG Vaccine for Intradermal Injection
汉语拼音：Pinei Zhusheyong Kajiermiao
【成分和性状】本品系用卡介菌经培养后收集菌体，加入稳定剂冻干制成。为白色疏松体或粉末,复溶后为均匀悬液。
【接种对象】出生3个月以内的婴儿或用 5IU PPD试验阴性的儿童(PPD试验后48～72小时局部硬结在5mm以下者为阴性)。
【作用与用途】接种本疫苗后，可使机体产生细胞免疫应答，用于预防结核病。
【规格】每瓶10次人用剂量含卡介菌0.5mg、5次人用剂量含卡介菌O．25mg。每1mg卡介菌含菌数应不低于1.0X 10〈6〉CFU。
【用法用量】(1)10次人用剂量乍介苗加入1ml所附稀释剂，5次人用剂量卡介苗加入0.5ml所附稀释剂，放置约1分钟，摇动使之溶解并充分混匀。疫苗溶解后必须在半小时内用完。
(2)用灭菌的lml蓝心注射器(25～26号针头)吸取摇匀的疫苗，在上臂外侧三角肌中部略下处皮内注射0.1ml。
【不良反应】接种后2周左右，局部可出现红肿浸润，若随后化脓，形成小溃疡，可用1％龙月胆紫涂抹，以防感染。一般8～1 2周后结痂，如遇局部淋巴结肿大软化形成脓疱，应及时诊治。
【禁忌】(1)患结核病、急性传染病、肾炎、心脏病者。
(2)患湿疹或其他皮肤病者。
(3)患免疫缺陷症者。
【注意事项】(1)严禁皮下或肌内注射!
(2)疫苗瓶有裂纹者不得使用。
(3)接种对象必须详细登记姓名、性别、年龄、住址、疫苗批号及亚批号、制造单位和接种日期。
(4)接种卡介苗的注射器应专用，不得用作其他注射，以防止产生化脓反应。
(5)使用时应注意避光。
【贮藏】于2～8℃避光保存和运输。
【包装】
【有效期】1年。
【执行标准】
【批准文号】
【生产企业】
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