拼音名：Shuangjia Shenzonghezheng Chuxuere Miehuoyimiao
英文名：Haemorrhagic Fever With RenaI Syndrome Bivalent Vaccine．Inactivated
书页号：2005年版三部- 86
本品系用I型和Ⅱ型肾综合征出血热(简称出血热)病毒分别接种原代沙鼠肾细胞，经培养、收获病毒液、灭活病毒，加入氢氧化铝佐剂后制成。用于预防I型和Il型肾综合征出血热。
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2 制造
2.1 生产用细胞
生产用细胞为原代沙鼠肾细胞。
2.1.1 细胞管理及检定
应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
2.1.2 细胞制备
选用10～20日龄沙鼠，无菌取肾，剪碎，经胰蛋白酶消化分散细胞，接种培养瓶，用MEM等适宜的培养基培养。
2.2 毒种
2.2.1 名称及来源
生产用毒株为I型出血热病毒Z〈［10］〉株和Il型出血热病毒Z〈［37］〉株。
2.2.2 种子批的建立
应符合“生物制品生产检定片用菌毒种管理规程”规定。
病毒接种鼠脑制备原始及主种子批，主种子批毒种接种原代沙鼠肾细胞制备工作种子批。I型病毒Z〈［10］〉株原始种子批传代应不超过第12代，主种子批应不超过第13代，工作种子批应不超过第18代；Il型病毒Z〈［37］〉株原始种子批应不超过第10代，主种子批应不超过第11代，工作种子批应不超过第16代。
2.2.3 种子批毒种的检定
主种子批应进行以下全面检定，工作种子批应全少进行2.2.3.1～2.2.3.4项检定。
2.2.3.1 鉴别试验
各型毒种分别与已知的相应型别的出血热病毒免疫血清等量混合，置37℃水浴90分钟，接种Vero-E〈［6］〉单层细胞，观察lO～14天，以免疫荧光法测定，中和指数应大于1000。
2.2.3.2 病毒滴定
取毒种lO倍系列稀释，接种Vero-E〈［6］〉细胞进行病毒滴定，滴度应不低于6．O lg CCID〈［50］〉/ml(荧光法)，或接种2～3日龄乳鼠或25～30日龄沙鼠，进行脑内毒力滴定，滴度应不低于7．O 1g LD〈［50］〉/ml。
2.2.3.3 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
2.2.3.4 支原体检查
依法检查(附录ⅫB)，应符合规定。
2.2.3.5 病毒外源因子检查
依法检查(附录ⅫC)，应符合规定。
2.2.3.6 免疫原性检查
取主种子批毒种制备双价原疫苗，接种2kg左右的白色家兔4只，每只后腿肌内注射1.0ml，7天后以同法再免疫1次。第一次免疫后4周采血分离血清，用蚀斑减少中和试验测中和抗体，试验用病毒为76-118株或UR株；同时用参考血清作对照，每只家兔的I型和Ⅱ型中和抗体滴度均应不低于1：10。
2.2.4 毒种保存
毒种应于-60℃以下保仔；液体工作种子批毒种于-60℃以下保存不得超过1年。
2.3 单价原液
2.3.1 细胞制备
同2.1.2项。
2.3.2 培养液
培养液为加入适量灭能小牛血清的MEM或其他适宜培养液。小牛血清的质量应符合要求(附录ⅫD)。
2.3.3 对照细胞病毒外源因子检查
依法检查(附录ⅫC)，应符合规定。
2.3.4 病毒接种和培养
当细胞培养成致密单层后，分别接种出血热病毒l型Z〈［10］〉株或Ⅱ型Z〈［37］〉株毒种，在适宜温度下培养一定时间后，弃去培养液，用PBS冲洗去除小牛血清，加入适量维持液继续培养3～5天。
2.3.5 病毒收获
收获前用荧光抗体法检查细胞的病毒感染率，应在95％以上。收获培养液，即为单价病毒收获液。
2.3.6 单价病毒收获液检定
按3.1项进行。
2.3.7 病毒灭活
病毒收获液中按1：4000的比例加入β-丙内酯和终浓度不高于0.10mg/ml的硫柳汞，置2～8℃7天或2～8℃过夜再放置37℃2小时，以灭活病毒和水解β-丙内酯。
2.3.8 合并
合并检定合格的灭活的病毒收获液，经离心、过滤并加入适量的人血白蛋白作为保护剂，即为单价原液。
2.3.9 单价原液检定
按3.2项进行。
2.4 半成品
2.4.1 配制
等量混合经检定合格的I型和Ⅱ型出血热病毒原液，加入终浓度不高于0.70mg/ml的氢氧化铝佐剂吸附，即为半成品。
2.4.2 半成品检定
按3.3项进行。
2.5 成品
2.5.1 分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.5.2 分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.5.3 规格
每瓶1.0ml。每1次人用剂量为1.0ml。
2.5.4 包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3 检定
3.1 单价病毒收获液检定
3.1.1 病毒滴定
将病毒收获液10倍系列稀释，取至少3个稀释度，分别接种Vero-E〈［6］〉细胞或沙鼠肾单层细胞，置适宜温度下培养7天左右，以免疫荧光染色法测定病毒滴度，应不低于6．O 1g CClD〈［50］〉／ml。
3.1.2 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
3.1.3 支原体检查
依法检查(附录ⅫB)，应符合规定。
3.2 单价原液检定
3.2.1 病毒灭活验证试验
按灭活后病毒收获液总量的0.1％取样，透析后接种Verc-E〈［6］〉细胞，连续传3代，每10～14天传1代，每代以免疫荧光法检查病毒，结果均应为阴性。
3.2.2 抗原量测定
可采用反向间接血凝试验进行抗原量测定，应不低于1：64。
3.2.3 牛血清白蛋白残留量
采用酶联免疫法，牛血清白蛋白残留量应不高于50ng／剂。
3.2.4 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，
3.3 半成品检定
无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，
3.4 成品检定
3.4.1 鉴别试验
应符合规定。
按2.2.3.6项进行，应符合规定。当效价测定不合格时，鉴别试验不成立。
3.4.2 外观
应为橘红色微浑浊液体，久置形成可摇散的沉淀，无异物。
3.4.3 化学检定
3.4.3.1 pH值
应为7.0～8.0(附录V A)。
3.4.3.2 硫柳汞含量
应不高于0.10mg/ml(附录ⅦB)。
3.4.3.3 氢氧化铝含量
应不高于0.70mg／m1(附录ⅦF)。
3.4.4 效价测定
按2.2.3.6项进行。免疫4只家兔．每只家兔对I型和Ⅱ型出血热病毒的中和抗体滴度均不应低于1：10。
3.4.5 热稳定性试验
疫苗出厂前应进行热稳定性试验。于37℃放置7天，按2.2.3.6项进行效价测定。如合格，视为效价测定合格。
3.4.6 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
3.4.7 细菌内毒素检查
应不高于100EU/剂(附录ⅫE凝胶限量试验)。
3.4.8 异常毒性检查
依法检查(附录ⅫF)，应符合规定。
4 保存、运输及有效期
于2～8℃避光保存和运输。自效价测定合格之日起，有效期为1年6个月。
5 使用说明
双价肾综合征出血热灭活疫苗使用说明
【药品名称】
通用名称：双价肾综合征出血热灭活疫苗
英文名称：Haemorrhagic Fever With Renal SyndromeBivalent Vaccine，Inactivated
汉语拼音：Shuangjia Shenzonghezheng Chuxuere Miehuoyimiao
【成分和性状】本品系用I型和Ⅱ型肾综合征出血热病毒接种原代沙鼠肾细胞，经培养、收获病毒液、灭活病毒，混合后加入氢氧化铝佐剂制成。为橘红色微浑浊液体，含硫柳汞防腐剂。
【接种对象】肾综合征出血热疫区的居民及进入该地区的人员，主要对象为16～60岁的高危人群。
【作用与用途】接种本疫苗后，可刺激机体产生抗I型和Ⅱ型肾综合征出血热病毒的免疫力。用于预防I型和Ⅱ型肾综合征出血热。
【规格】每瓶1．Oml。每1次人用剂量为1.0ml。
【用法用量】(1)于上臂外侧三角肌肌内注射。
(2)基础免疫为2针，于第0人、第14天各注射1次；基础免疫后6个月加强免疫1针，每1次1.0m1。
【不良反应】注射后一般无反应，个别有发热、头晕、皮疹者应注意观察，必要时给予适当治疗。因疫苗含有氢氧化铝佐剂，少数人在注射后局部可出现硬结、轻度肿胀和疼痛，一般在l～3天内自行消退。
【禁忌】(1)发热，患急性疾病、严重慢性疾病、神经系统疾病者。
(2)患过敏性疾病、对抗生素或生物制品有过敏史者。
(3)哺乳期、妊娠期妇女。
【注意事项】(1)注射前应充分摇匀。
(2)疫苗异常浑浊、变色、有异物及摇不散的块状物或疫苗瓶有裂纹者，均不得使用。
(3)应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应在现场休息片刻。
(4)严禁冻结。
【贮藏】丁2～8℃避光保存和运输。
【包装】
【有效期】1年6个月。
【执行标准】
【批准文号】
【生产企业】
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