拼音名：Xifu Wuxibao Boi Bai Po Lianhe Yimiao
英文名：Diphtheria，Tetanus and AcelluIar Pertussis Combined Vaccine，Adsorbed
书页号：2005年版三部-58
本品系由无细胞百口咳疫苗原液、白喉类毒素原液及破伤风类毒素原液加入氢氧化铝佐剂制成。用于预防百日咳、白喉、破伤风。
l 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2 制造
2.1 混合前单价原液
2.1.1 无细胞百日咳疫苗原液制造应符合本品种附录的规定。
2.1.2 白喉类毒素原液制造应符合“吸附白喉疫苗”中2.1～2.2项的规定。
2.1.3 破伤风类毒素原液制造应符合“吸附破伤风疫苗”中2.1～2.2项的规定。
2.1.4 原液检定
2.1.4.1 百日咳疫苗原液检定
按本品种附录中2项进行。
2.1.4.2 白喉类毒素原液检定
按“吸附白喉疫苗”中3.1项进行。
2.1.4.3 破伤风类毒素原液检定
按“吸附破伤风疫苗”中3.1项进行。
2.2 半成品
2.2.1 配方
每lml半成品中各种抗原成分含量如下：
无细胞百日咳疫苗原液 18μg PN
白喉类毒素 25Lf
破伤风类毒素 7Lf
2.2.2 佐剂配制
2.2.2.1 配制氧氧化铝，可用三氯化铝加氨水法或二氯化铝加氯氧化钠法。用氨水配制者需透析除氨后使用。也可用其他适宜方法配制。
2.2.2.2 配制成的氢氧化铝原液应为浅蓝色或乳白色的胶体悬液，不应含有凝块或异物。
2.2.2.3 氢氧化铝原液应取样测定氢氧化铝及氯化钠含量。
2.2.3 合并及稀释
将白喉类毒素、破伤风类毒素及无细胞百日咳疫苗原液加入已稀释的佐剂内，调节pH值至5.8～7.2。
2.2.4 半成品检定
按3.1项进行。
2.3 成品
2.3.1 分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.3.2 分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.3.3 规格
每瓶0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml。每1次人用剂量0.5ml，含无细胞百日咳疫苗效价应不低于4.0IU，白喉疫苗效价应不低于30IU，破伤风疫苗效价应不低于40IU。
2.3.4 包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3 检定
3.1 半成品检定
无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
3.2 成品检定
3.2.1 鉴别试验
3.2.1.1 无细胞百日咳疫苗
抽取本品按3.2.4.1进行，应产生相应抗体，或采用其他适宜的抗原抗体反应试验。
3.2.1.2 白喉类毒素
可选择下列一种方法进行：(1)疫苗注射动物应产生抗体(附录ⅪC)；(2)疫苗加枸橼酸钠或碳酸钠将佐剂溶解后，做絮状试验(附录ⅪD)，应出现絮状反应；(3)疫苗经解聚液溶解佐剂后取上清，做凝胶免疫沉淀试验(附录ⅧC)，应出现免疫沉淀反应。
3.2．l．3破伤风类毒素
可选择下列一种方法进行：(1)疫苗注射动物后应产生破伤风抗体(附录ⅪB)；(2)疫苗加入枸橼酸钠或碳酸钠将吸附剂溶解后做絮状试验(附录ⅪD)，应出现絮状反应；(3)疫苗经解聚液溶解佐剂后取上清，做凝胶免疫沉淀试验(附录ⅧC)，出现免疫沉淀反应。
3.2.2 外观
振摇后应呈均匀乳白色混悬液，无摇不散的凝块或异物。
3.2.3 化学检定
3.2.3.1 pH值
应为5.8～7.2(附录V A)。
3.2.3.2 氯化钠含量
应为7.5～9.5g/L(附录ⅦG)。
3.2.3.3 氯氧化铝含量
应为1.0～1.5mg/ml(附录ⅦF)。
3.2.3.4 硫柳汞含量
应不高于0.1g/L(附录Ⅶ B)。
3.2.3.5 游离甲醛含量
应不高于0.2g/L(附录ⅥL)。
3.2.3.6 戊二醛含量
应小于 0.01g/L(附录ⅥI)
3.2.4 效价测定
3.2.4.1 无细胞百日咳疫苗
按“吸附百白破联合疫苗”中附录2进行。以适宜的稀释倍数稀释至第一个免疫剂量，再按5倍系列稀释。免疫时间为21天。每1次人用剂量的免疫效价应不低于4.0IU；95％可信限的低限应不低于2.0IU。如达不到上述要求时可进行复试。但所有的有效试验结果必须以几何平均值(如用概率分析法时，应用加权几何平均)来计算。达到上述要求即判为合格。
3.2.4.2白喉疫苗
每1次人用剂量中白喉类毒素的免疫效价应不低于30IU(附录ⅪC)。
3.2.4.3 破伤风疫苗
每1次人用剂量中破伤风类毒素的免疫效价应不低于40IU(附录ⅪB)。
3.2.5 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
3.2.6 特异性毒性检查
3.2.6.1 无细胞百日咳疫苗
按本品种附录中2.5项进行。
3.2.6.2 白喉、破伤风疫苗
用体重250～350g豚鼠，每批制品不少于4只，每只腹部皮下注射2.5ml，分两侧注射，每侧1.25ml，观察30天。注射部位可有浸润，经5～10天变成硬结，可能30天不完全吸收。在第10天、第20天、第30天称体重，到期体重比注射前增加，局部无化脓、无坏死、无破伤风症状及无晚期麻痹症者为合格。
3.2.7 毒性逆转试验
每批供试品置37℃ 4周，按本品种附录中2.6项进行。
4 保存、运输及有效期
于2～8℃避光保存和运输。自吸附之日起有效期为2年，自百日咳原液脱毒之日起总有效期不得超过3年。
5 附录
无细胞百日咳疫苗原液制造及检定要求
6 使用说明
附录 无细胞百日咳疫苗原液制造及检定要求
本品系由百日咳杆菌的培养物或其上清液，经硫酸铵盐析和密度梯度离心法提取百日咳毒素(PT)和丝状血凝素(FHA)等有效组分，经脱毒制成。用于制备吸附无细胞百白破联合疫苗。
l 制造
1.1 菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
1.1.1 菌种的名称
生产用菌种应采用百日咳I相CS菌株或其他适宜菌株。
1.1.2 种子批的建立
应符合“生物制品生产榆定用菌毒种管理规程”的规定。
1.1.3 种子批菌种的检定
1.1.3.1 培养特性
于包-姜(BOrdet-Gengou)培养基或其他适宜培养基上培养，各菌株应具有典型的形态及生化特性。
1.1.3.2 血清学试验
取经35～37℃培养40～48小时的菌苔，混悬于生理氯化钠溶液或PBS内，制成适宜浓度的菌悬液，与I相参考血清做定量凝集反应，凝集效价应达到血清原效价之半。同时与单价分型血清做定性凝集反应，其型别应与该菌种标定型别相同。
1.1.3.3 皮肤坏死试验
取经35～37℃培养40～48小时的菌苔，混悬于PBS内，并稀释成不同浓度的菌液；取家兔或豚鼠至少2只，分别用每一稀释度的菌液皮内注射0.1ml，经72小时观察注射部位的皮肤反应，如其中1只家兔或豚鼠在注射含菌4.0×10〈7〉以下稀释度的部位出现出血性坏死者，为阳性反应，判为合格。
1.1.3.4 毒力试验
用体重16～18g的小鼠至少3组．每组至少10只，在麻醉状态下从鼻腔滴入经培养20～24小时、以PBS稀释的菌液0.05ml，观察14天，记录小鼠生死情况．按Reed- Muench法计算LD〈［50］〉，1LD〈［50］〉的菌数应不高于1.2×10〈8〉。
1.1.3.5 效价测定
按“吸附百白破联合疫苗”附录2进行。即先将原液稀释至成品的浓度后，以适宜的稀释倍数为第一个免疫剂量，再按5倍系列稀释，免疫21天后攻击。
1.2 原液
1.2.1 生产用种子
将工作种子批菌种启开后，接种于改良包-姜培养基或其他适宜培养基上，于35～37℃培养不超过72小时，第2代不超过48小时，然后接种于S-S(Stainer-Scholte)培养基或其他适宜培养基上，于35～37℃培养不超过48小时用于生产。传代菌种保存不得超过14天，工作种子批启开后用于生产时不应超过10代。
1.2.2 生产用培养基
应选用经批准的培养基。
1.2.3 培养
可采用静置培养法或发酵罐培养法，培养过程应取样做纯菌检查。
1.2.4 收获和杀菌
培养物于对数生长期后期或静止期前期收获。在培养物中加入硫柳汞杀菌。
1.2.5 纯化
采用硫酸铵盐析和蔗糖密度梯度离心去除内毒素，收集PT、FHA有效组份。
1.2.6 蛋白氮含量测定
依法测定(附录ⅥB第二法)。
1.2.7 纯度测定
采用聚丙烯酰胺凝胶电泳或SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，应显示主要含有PT和FHA两种组分，且批间比例应保持一致。PT和FHA等有效组分应不低于总蛋白含量的85％。
1.2.8 脱毒和匀化
采用甲醛溶液或戊二醛溶液脱毒，然后用适宜方法除去脱毒剂，再经超声波匀化处理即为原液。
2 检定
2.1 染色镜检
取供试品的沉淀物，涂片染色镜检，不应有百日咳杆菌和其他细菌。
2.2 效价测定
按“吸附百白破联合疫苗”附录2进行。即先将原液稀释至成品的浓度后，以适宜的稀释倍数为第一个免疫剂量，冉按5倍系列稀释，免疫21天后攻击。
2.3 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
2.4 不耐热毒素试验
用生理氯化钠溶液将供试品稀释至半成品浓度的2倍，用48～72小时龄的乳鼠至少4只，每只皮内注射0.025m1，或用体重2.5kg的家兔至少2只，每只皮内注射0.1m1，观察4 日，受试动物不得出现不耐热毒素引起的任何局部反应。
2.5 特异性毒性检查
用生理氯化钠溶液将毒性参考品做3倍系列稀释，将供试品稀释至与成品相同浓度。用体重14～16g NIH小鼠(雌性或雌雄各半)，至少10只为一组，供试品和毒性参考品的每一稀释度各用一组，每只小鼠腹腔注射0.5ml，分别进行2.5.1～2.5.3项试验。
2.5.1 小鼠体重减轻试验
于注射前和注射后16小时分别称取小鼠体重，试验结果经统计学方法处理后，注射供试品的小鼠体重减轻毒性的活性应不高于10 BWDU/ml。
2.5.2 小鼠白细胞增多试验
于注射后3日分别取小鼠末梢血进行白细胞计数。试验结果经统计学方法处理后，注射供试品的小鼠白细胞增多毒性的活性应不高于0.5LPU/ml。
2.5.3 小鼠组胺致敏试验
于注射后4日，每只小鼠腹腔注射0.5ml溶液(含二盐酸组胺4mg或二磷酸组胺2mg)，30分钟后分别测小鼠肛温。试验结果经统计学方法处理后，供试品的小鼠组胺致敏毒性的活性应不高于0.8 HSU/ml。
2.6 毒性逆转试验
每批供试品置37℃ 4周，然后按2.5.3项进行试验。
2.7 热原检查
用生理氯化钠溶液将供试品稀释成半成品浓度的1/50，依法检查(附录ⅫD)，应符合规定。注射剂量按家兔体重每lkg注射lml。
3 保存、运输及有效期
于2～8℃避光保存和运输。原液自脱毒之日起总有效期为3年。
吸附无细胞百白破联合疫苗使用说明
【药品名称】
通用名称：吸附无细胞百白破联合疫苗
英文名称：Diphtheria，Tetanus and Acellular Pertus sis Combined Vaccine．Adsorbed
汉语拼音：Xifu Wuxibao Bai Bai Po Lianhe Yimiao
【成分和性状】本品系由无细胞百日咳疫苗原液、白喉类毒素原液及破伤风类毒素原液加氢氧化铝佐剂制成。为乳白色悬液，放置后佐剂下沉，摇动后即成均匀悬液，含防腐剂。
【接种对象】3个月～6周岁儿童。
【作用与用途】接种本疫苗后，可使机体产生免疫应答。用于预防百日咳、白喉、破伤风。
【规格】每瓶0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml。每1次人用剂量0.5ml，含无细胞百日咳疫苗效价不低于4.0lU，白喉疫苗效价不低于30IU，破伤风疫苗效价不低于40lU。
【用法用量】(1)臀部或上臂外侧三角肌肌内注射。
(2)基础免疫：共3针．自3月龄开始至12月龄，每针间隔4～6周，每次注射0.5ml。
加强免疫通常在基础免疫后18～24月龄内进行，注射剂量为0.5ml。
【不良反应】注射本品一般无不良反心．有的接种部位有轻度红晕、痒感或有低热，一般不需特殊处理，即自行消退，如有严重反应及时诊治。
【禁忌】(1)有癫痫、神经系统疾病及惊厥史者。 (2)患急性传染病(包括恢复期)及发热者．暂缓注射。
(3)有过敏史者。
【注意事项】(1)使用时应充分摇匀，如出现摇不散之凝块、有异物、疫苗曾经冻结、清者，均不得使用。
(2)注射后局部可能有硬结，可逐步吸收。注射第2针时应更换另侧部位。
(3)应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应在现场休息片刻。
(4)注射第1针后出现高热、惊厥等异常情况者，不再注射第2针。
(5)严禁冻结。
【贮藏】于2～8℃避光保存和运输。
【包装】
【有效期】2年。
【执行标准】
【批准文号】
【生产企业】
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