药典2000版-重组人生长激素

时间：2009-10-28 |来源：三九中医药网 收集整理|点击：次


    拼音名：Chongzu Ren Shengzhangjisu
    英文名：Recombinant Human Somatropin
    书页号：2000年版二部-494　　本品是由191个氨基酸残基或N端有一甲硫氨酸的192个氨基酸残基组成的蛋白，可加适量赋形剂或稳定剂。含重组人生长激素量应为标示量的90.0％～110.0％。
　　本品由DNA重组技术生产，必须在生产过程中，用体内生物测定方法测定其生物效价，每1mg蛋白效价不得少于2.5单位。
　　重组人生长激素中残余宿主DNA和宿主细胞蛋白为与生产过程相关的、潜在的特异性杂质，必须在生产过程中严格控制，其限度应符合有关规定。

    【性状】本品为白色冻干粉末。

    【鉴别】(1)取本品，加水制成每1ml中含2mg的溶液后，加入等体积的样品缓冲液(取浓缩胶缓冲液2.5ml、20％十二烷基硫酸钠2.5ml、0.1％溴酚蓝溶液1.0ml、87％甘油3.5ml，加水至10ml)，再加β-巯基乙醇至终浓度为5％，置水浴中3分钟，放冷，作为供试品溶液；另取重组人生长激素对照品或甲酰化重组人生长激素对照品，同法制备，作为对照品溶液。取对照品溶液和供试品溶液各5μl，加至样品孔，照电泳法(附录Ⅴ F 第五法，银染色)试验，供试品主成分迁移率应与相应的对照品迁移率一致。
　　(2)在相关蛋白质检查项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与相应的对照品(重组人生长激素或甲酰化重组人生长激素对照品)的保留时间一致。
　　(3)取本品适量，用水制成每1ml中含2mg的溶液，取150μl，加三羟甲基氨基甲烷-醋酸缓冲液(取氯化钙0.294g、三羟甲基氨基甲烷12.11g，加水400ml使溶解，再用5mol/L醋酸溶液调节pH值至8.5，加水至500ml)150μl、胰蛋白酶溶液[取经TPCK处理的胰蛋白酶适量，用1mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液(pH5.0)制成每1ml中含1mg的溶液]10μl，混匀，置37℃水浴中4小时，加冰醋酸60μl终止反应，作为供试品溶液；另取重组人生长激素或甲酰化重组人生长激素对照品适量，同法制备，作为对照品溶液。照高效液相色谱法(附录Ⅴ D)试验，以辛基硅烷键合硅胶为填充剂(5～10μm)；以0.1％三氟醋酸溶液为流动相A，0.1％三氟醋酸的乙腈溶液为流动相B，进行梯度洗脱。流速为每分钟1.0ml；柱温为35℃；检测波长为214nm。
　　　　　　　　　　 时间　　　　 流动相A　　　　 流动相B　　　　　　　　　　 0分　　　　　 100％　　　　　　0％　　　　　　　　　　 20分　　　　　 80％　　　　　 20％　　　　　　　　　　 45分　　　　　 75％　　　　　 25％　　　　　　　　　　 70分　　　　　 50％　　　　　 50％　　　　　　　　　　 75分　　　　　 20％　　　　　 80％　　取对照品溶液和供试品溶液各100μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品的肽图谱应与对照品的肽图谱一致。

    【检查】相关蛋白质　取本品适量，用0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(pH7.5)制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液；另取重组人生长激素或甲酰化重组人生长激素对照品适量，同法制备，作为对照品溶液。照高效液相色谱法(附录Ⅴ D)测定，以丁基硅烷键合硅胶为填充剂(5～10μm)；0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(pH7.5)-正丙醇(约为71：29)为流动相，调节流动相中正丙醇比例使人生长激素主峰保留时间为30～36分钟；流速为每分钟0.5ml；柱温为45℃；检测波长为220nm。取系统适用性试验用溶液[取重组人生长激素对照品或甲酰化重组人生长激素对照品，用上述三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液制成每1ml中含2mg的溶液，加过氧化氢溶液使终浓度为0.01％(ml/ml)，在4℃放置5小时后，每1ml加4.5mg的L-甲硫氨酸]20μl注入液相色谱仪，重组人生长激素主峰与氧化的重组人生长激素峰之间的分离度应符合规定。取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算，总相关蛋白质含量不得过10.0％。
　　高分子蛋白质　取本品适量，照含量测定项下方法检查，按面积归一化法计算，高分子蛋白质含量不得过4.0％。
　　无菌　取本品，依法检查(附录Ⅺ H 薄膜过滤法)，应符合规定。
　　水分　取本品，照水分测定法(附录Ⅷ M 第一法 A)测定，含水分不得过10.0％。
　　细菌内毒素　取本品，依法检查(附录Ⅺ E)，每1mg重组人生长激素中含内毒素的量应小于5EU。

    【含量测定】照高效液相色谱法(附录Ⅴ D)测定。
　　色谱条件与系统适用性试验　以适合分离分子量为5000～60000球状蛋白的色谱用亲水硅胶为填充剂；以0.395％碳酸氢铵溶液为流动相；流速为每分钟0.6ml；检测波长为214nm。取系统适用性试验用溶液(取人生长激素单体-二聚体对照品，用流动相制成每1ml中含1.5mg的溶液)20μl注入液相色谱仪，以人生长激素单体和二聚体之间的峰谷高与二聚体的峰高之比作为分离度，分离度应不大于0.6。
　　测定法　取本品，加流动相制成每1ml中含1.0mg的溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取重组人生长激素对照品适量，同法则定。按外标法以峰面积计算。

    【类别】生长激素类药。

    【贮藏】密闭，2～8℃保存。

    【制剂】注射用重组人生长激素