药典2000版-尿激酶

时间：2009-10-28 |来源：三九中医药网 收集整理|点击：次


    拼音名：Niaojimei
    英文名：Urokinase
    书页号：2000年版二部－323
    
　　本品系从新鲜人尿中提取的一种能激活纤维蛋白溶酶原的酶。它是由高分子量54 000和低分子量33 000组成的混合物，高分子量含量不得少于90％，每1mg 蛋白中尿激酶活力不得少于12万单位。
　　本品在生产过程中需经60℃加热10小时，以使病毒灭活。

    【性状】　本品为白色状粉末。

    【鉴别】　取效价测定项下的供试品溶液，用巴比妥－氯化钠缓冲液（pH 7.8）稀释成每1ml 中含20单位的溶液，吸取1ml ，加牛纤维蛋白原溶液0.3ml ，再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液0.2ml ，牛凝血酶溶液0.2ml ，迅速摇匀，立即置37℃±0.5℃恒温水浴中保温，记时，反应系统应在30～45秒内凝结，且凝块在15分钟内重新溶解。以0.9％氯化钠溶液作空白，同法操作，凝块在2 小时内不溶（试剂的配制同效价测定）。

    【检查】　溶液的澄明度与颜色　取本品，加 0.9％氯化钠溶液制成每1ml 中含3000单位的溶液，应澄明无色。
　　分子组分比　取本品，加水制成每1ml中含2mg的溶液后，加入等体积的缓冲液（取浓缩胶缓冲液2.5ml、20％十二烷基硫酸钠溶液2.5ml、0.1％溴酚蓝溶液1.0ml与87％甘油溶液3.5ml，加水至10ml），置水浴中3分钟，放冷，作为供试品溶液；取供试品溶液10μl，加至样品孔，照电泳法（附录Ⅴ F第五法　考马斯亮蓝染色）测定，按下式计算高分子尿激酶相对含量（％）
　　　　　　　　　　　　　　　　　高分子尿激酶峰面积
　　 高分子尿激酶相对含量(％)＝─────────────── ×100 ％
　　　　　　　　　　　　　　　　高、低分子尿激酶峰面积之和

　　干燥失重　取本品，以五氧化二磷为干燥剂，在60℃减压干燥至恒重，减失重量不得过5.0%（附录Ⅷ L）。

　　异常毒性　取本品，加氯化钠注射液制成每1ml 中含5000 单位的溶液，依法检查（附录Ⅺ C），按静脉注射法给药，应符合规定。

　　热原　取本品，加氯化钠注射液制成每1ml 中含2万单位的溶液，依法检查（附录Ⅺ D），按家兔体重每1kg 注射1ml ，应符合规定。

　　凝血质样活性物质　(1) 血浆的制备　从正常空腹献血者静脉采血，开始的2 ～3滴弃去，加入预先加有20％草酸钾溶液的聚乙烯输血袋（每10ml血加20％草酸钾溶液0.15ml），混匀，置0 ～5 ℃离心机内，以每分钟20 000转离心20分钟，使血浆澄清。血浆的复钙试验凝固时间应在12～17分钟内，如小于12分钟，应再离心或放置在0 ～5 ℃冰箱中，达到12分钟以后即可使用。在－20℃速冻保存备用，用前在25℃融化。

　　(2) 复钙试验　取小试管（12mm×75mm）6支，各加血浆0.1ml、6-氨基己酸溶液[取 6－氨基己酸1.97g ，加巴比妥缓冲液(pH7.4) 使溶解，并稀释至50ml]0.1ml 及巴比妥缓冲液(pH7.4)0.1ml，再依次分别加入氯化钙溶液（取氯化钙1.84g ，加水使溶解并稀释至500ml ）0.10ml、0.12ml、0.14ml、0.16ml、0.18ml、0.20ml，迅速置25℃水浴中保温，观察凝固时间。在上述系列试管中，以凝固时间最短的一管所加的氯化钙量，为复钙试验的氯化钙溶液用量。

　　(3) 测定法　取本品，加巴比妥缓冲液(pH7.4) 使成每1ml 中含10 000单位、5000单位 、2500单位 、1250单位 、625单位及312单位的供试品溶液。若供试品中含乙二胺四醋酸盐或磷酸盐，必须先经巴比妥缓冲液(pH7.4) 在2℃透析除去，再配成上述浓度的溶液。

　　取小试管(12mm×75mm)8支，第1和第8管各加巴比妥缓冲液(pH7.4)0.1ml作空白对照，其余6 管分别加入上述倍比稀释的供试品溶液各0.1ml,再依次加入上述6-氨基已酸溶液和血浆各0.1ml ，轻轻摇匀，在25℃水浴中，静置2 ～3 分钟，迅速加入已预温至25℃的复钙试验所需的上述氯化钙溶液用量，混匀，记录放入时间。注意观察血浆凝固，观察时轻轻倾斜，避免影响凝血过程，记录凝固时间，两支对照管的误差不得大于1分钟。

　　空白对照管凝固时间减去供试品管凝固时间等于复钙试验凝固缩短时间。

　　在单对数纸上，以供试品溶液的浓度为纵座标，以复钙试验凝固缩短时间（秒）为横坐标，绘图，连接不同稀释度的供试品各点，应成一直线，此直线外延至纵轴，与纵轴的交点即表示供试品浓度，也是凝血质样活性为零值时的供试品酶活力，按每1ml 中供试品的单位表示，每1ml 应大于150 单位。

    【效价测定】　比活测定　(1) 试剂　牛纤维蛋白原溶液　取牛纤维蛋白原，加巴比妥一氯化钠缓冲液（pH 7.8）制成每1ml 中含6.67mg可凝结蛋白的溶液。

　　牛凝血酶溶液　取牛凝血酶，加巴比妥－氯化钠缓冲液（pH 7.8）制成每1ml 中含6.0 单位的溶液。

　　牛纤维蛋白溶酶原溶液　取牛纤维蛋白溶液酶原，加三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH9.0）制成每1ml 中含1 ～1.4 酪蛋白单位的溶液（如溶液浑浊，离心，取上清液备用）。

　　混合溶液　临用前取等容积的牛凝血酶溶液和牛纤维蛋白溶酶原溶液，混匀。

　　(2) 标准品溶液的制备　取尿激酶标准品，加巴比妥－氯化钠缓冲液(pH 7.8)制成每1ml 中含60单位的溶液。

　　(3) 供试品溶液的制备　取本品适量，用巴比妥－氯化钠缓冲液(pH 7.8)溶解、混匀，并稀释成与标准品溶液相同的浓度。

　　(4) 测定法　取试管4 支，各加牛纤维蛋白原溶液0.3ml ，置37℃±0.5℃水浴中，分别加入巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)0.9ml、0.8ml、0.7ml、0.6ml，依次加标准品溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml，再分别加混合溶液0.4ml ，立即摇匀，分别计时。反应系统应在30～40秒内凝结，当凝块内小气泡上升到反应系统体积一半时作为反应终点，记时。以尿激酶的浓度为横座标，以反应终点时间与入水浴时间的差值为纵座标，在双对数纸上绘制标准曲线，应呈直线。供试品按上法测定，在标准曲线上求得效价(单位)。标准品和供试品各作二次，所得的直线亦应平行，否则应重复试验。

　　蛋白质含量　取本品约10mg，精密称定，照氮测定法（附录Ⅶ D第二法）测定，将结果乘以6.25，即得供试品中蛋白含量，并计算每1mg供试品中的蛋白量（mg）。

　　比活　 按下式计算比活。
　　　　　　　　　　　　　　　每1mg供试品的效价(单位)
　　　　　　　　　　比活＝──────────────
　　　　　　　　　　　　　　 每1mg供试品中蛋白量（mg）

    【类别】　蛋白分解酶。

    【贮藏】　遮光, 密封,在10℃以下保存。

    【制剂】　注射用尿激酶